ヒト唾液腺癌細胞のDNA脱メチル化による分化誘導―骨芽細胞への変換

DNA去甲基化诱导人唾液腺癌细胞分化-转化为成骨细胞

• 批准号: 14771138
• 负责人: 内田 大亮
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771138/
• 关键词: BMP-2; Cbfa1; DNAメチル化; ヒト唾液腺癌細胞

昨年度、骨基質遺伝子であるalkaline phosphatase (ALP),type I collagen (ColI),bone sialoprotein (BSP),oseteocalcin (Oc),osteopontin (Op),Cbfa1の発現の比較を半定量性Reverse transcritption-polymerase chain reaction (RT-PCR)法にて検索しが,ALP, Oc, Opにおいては増幅が認められず、BSP, ColIにおいては細胞間における発現差が認められないものの、Cbfa1,BMP-2の発現がHSG-AZA3細胞において著明に増強していることを確認している。しかしながら、DNA脱メチル化剤5-aza-2'deoxycytidine処理後のHSG細胞では、Cbfa1,BMP-2 mRNAの発現変化は認められないため、HSG-AZA3細胞ではこれらの因子の発現に影響を与えるようなメチル化遺伝子の活性化が生じていることが予想される。そのため、HSG細胞を上記脱メチル化剤で処理することにより、発現変化を生じる遺伝子をcDNAマイクロアレイ(日立ソフト)にて単離した。その結果、骨基質関連遺伝子の発現変化は認められなかったが、機能不明のDNAJC8と癌抑制遺伝子p15において、5-aza-2'deoxycytidine処理後のHSG細胞において、約4倍程度の発現上昇を認めた。そのため、これら遺伝子に対する特異的PCRプライマー(DNAJC8-UP:5'-ACAATTGTAGAGGAGGATGA-3',DNAJC8-DN: 5'-AGCAGGAAGGGAGATAGCAG-3',p15F:5'-ATGCGCGAGGAGAACAAGGGCAT-3',p15R:5'-GGGCGGCTGGGGAACCTGGGCGTCA-3')を設計し、RT-PCR法を用いてこれら遺伝子の発現変化を再確認したところ、双方の遺伝子において軽度の発現上昇を認めた。次にこれら遺伝子におけるプロモーター領域をヒトゲノムプロジェクトの配列よりコンピュータークローニングにて単離した。しかしながら、既存のメチル化遺伝子に比較して、TATA boxとその近傍におけるCpG領域は少なかったことより、これら遺伝子の5-aza-2'deoxycytidine処理による発現上昇は、本薬剤の脱メチル化作用に非依存的なものであることが示唆された。現在、3倍程度の発現上昇が認められた数種類の遺伝子に関して同様の方法を用いて検索中である。

Last year,bone matrix exudates 伝 and であるalkaline phosphatase (ALP),type I collagen (ColI),bone sialoprotein (BSP),oseteocalcin (Oc),osteopontin (Op),Cbfa1 <s:1> compared with を semi-quantitative Reverse transcritorption polymerase chain reaction (RT-PCR) method にて検 the increase in <s:1> が,ALP, Oc, Opにお て て て が が compared with められず, BSP ColI に お い て は intercellular に お け る 発 poor が now recognize め ら れ な い も の の, Cbfa1, BMP - 2 の 発 now が HSG cells - AZA3 に お い て zhao Ming に raised strong し て い る こ と を confirm し て い る. <s:1> ながら, DNA deoxycytidine 5-aza-2'deoxycytidine treated with <s:1> HSG cells で, Cbfa1,BMP-2 MRNA の 発 now - the は recognize め ら れ な い た め, HSG - AZA3 cell で は こ れ ら の factor の 発 に influence を and え る よ う な メ チ ル the heritage 伝 son の activeness が raw じ て い る こ と が to think さ れ る. そ の た め, HSG cells を written off メ チ ル the tonic で 処 Richard す る こ と に よ り, 発 now - born を じ る posthumous son 伝 を cDNA マ イ ク ロ ア レ イ (Hitachi ソ フ ト) に て 単 from し た. そ の results, bone matrix masato even heritage 伝 son の 発 now - the は recognize め ら れ な か っ た が, function unknown の DNAJC8 と cancer inhibition of heritage 伝 son p15 に お い て, 5 - aza - 2 'deoxycytidine 処 Richard の after HSG cells に お い て, about 4 times の 発 now rising を recognize め た. そ の た め, こ れ ら posthumous son 伝 に す seaborne る specific PCR プ ラ イ マ ー (DNAJC8 - UP: 5 '- ACAATTGTAGAGGAGGATGA - 3' DNAJC8 - DN: 5 '- AGCAGGAAGGGAGATAGCAG - 3' p15F: 5 '- ATGCGCGAGGAGAACAAGGGCAT - 3, p15R: 5' - GGGCGGCTGGGGAACCTGGGCGTCA - 3) を design し, rt-pcr method を い て こ れ ら 伝 The occurrence of the transformation of the sub-projects を reconfirm the たと ろ ろ ろ, and the degree of the 伝 sub-projects にお て軽 て軽 て軽 of the cultural heritage of both sides を increase in recognition めた. Traces of time に こ れ ら 伝 son に お け る プ ロ モ ー タ ー field を ヒ ト ゲ ノ ム プ ロ ジ ェ ク ト の match column よ り コ ン ピ ュ ー タ ー ク ロ ー ニ ン グ に て 単 from し た. <s:1> に ながら, existing メチ メチ 伝, fossilized 伝 に comparison て, TATA Box と そ の nearly alongside に お け る CpG domain は less な か っ た こ と よ り, こ れ ら posthumous son 伝 の 5 - aza - 2 'deoxycytidine 処 Richard に よ る 発 rise は, now this 薬 tonic の メ off チ ル role に not dependent of な も の で あ る こ と が in stopping さ れ た. Now, there is a threfold increase in the が recognition of められた types of cultural heritage 伝 sub-に related <s:1> て the same <s:1> method を using て検 て検 to search である.