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メカノケミカル固相重合を用いるDNAコンジュゲートの構築とその特性

机械化学固相聚合 DNA 缀合物的构建及其性质

基本信息

批准号：
14771266
负责人：
近藤伸一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Gifu Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

高分子側鎖にオリゴDNAを結合させたDNAコンジュゲートを用いるキャピラリー電気泳動は遺伝子配列内の1塩基変異に基づく多型(SNP)解析法として有用であることが、近年、明らかとなった。本研究はメカノケミカル固相重合法によりDNAコンジュゲートを構築し、より高分離能のDNAコンジュゲート開発を目指すものである。前年度においては、アクリルアミドとメタクリロイルスクシイミドの共重合体を本重合法により合成し5'-アミノリンカーオリゴDNAと反応させることにより単分散性に近い分子量分布を持ち、オリゴDNAの担持率が0.03mol%であるDNAコンジュゲート(Poly)を構築した。本年度においては、前年度に合成したPolyの分離能を、ラジカル開始溶液重合により合成したオリゴDNA担持率および分子量がほぼ同じであるDNAコンジュゲート(Poly-R)と比較することにより検討した。モデルオリゴDNAとして完全に相補的塩基対を形成するAAAAAAAA(PM)とそのSNP体であるAAAATAAA(SN-1)およびAAAAAATA(SN-2)を用いた。溶離液としてpH7.4のTB溶液を用いた場合、いずれのDNAコンジュゲートを用いてもPMとSN-1とを分離することができたが、PMとSN-2とを分離することはできなかった。そこで、TB溶液にMgCl_2を75μmol添加したところ、PolyではPMとSN-2とを明確に分離することが可能であったが、Poly-Rの場合はPolyの場合に比べて明らかに分離が不十分であった。以上の結果より、メカノケミカル固相重合により構築したDNAコンジュゲートの方がより高い分離能を示し、本方法により合成したDNAコンジュゲートが単分散性に近い分子量を持つことに加え、重合法の違いによる高分子構造(モノマーシーケンス)の差異が高分離能の要因である可能性が示唆された。

Polymer-based DNA sequencing is useful in recent years. This study is aimed at the development of DNA sequencing by solid-phase recombination. In the previous year, the DNA complex was synthesized by the method of synthesis and molecular weight distribution, and the DNA content was 0.03 mol %. This year's Poly was synthesized in the same way as the previous year's Poly. The separation energy, synthesis and molecular weight of Poly were compared. A complete complement of DNA is used in the formation of AAAAAAA (PM) and AAAAATA (SN-1). The isolation solution pH7.4 contains DNA fragments that can be isolated from SN-1. In addition, MgCl_2 was added to TB solution at 75μmol. In addition, PM and SN-2 were separated clearly. In the case of Poly-R, the separation was not very clear. The above results show that the method for constructing DNA protein by solid-phase recombination has high separation energy, and the method for synthesizing DNA protein by this method has high dispersibility, high molecular weight, and high separation energy.