メカノケミカル固相重合を用いるDNAコンジュゲートの構築とその特性

机械化学固相聚合 DNA 缀合物的构建及其性质

基本信息

批准号：
14771266
负责人：
近藤伸一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Gifu Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

高分子側鎖にオリゴDNAを結合させたDNAコンジュゲートを用いるキャピラリー電気泳動は遺伝子配列内の1塩基変異に基づく多型(SNP)解析法として有用であることが、近年、明らかとなった。本研究はメカノケミカル固相重合法によりDNAコンジュゲートを構築し、より高分離能のDNAコンジュゲート開発を目指すものである。前年度においては、アクリルアミドとメタクリロイルスクシイミドの共重合体を本重合法により合成し5'-アミノリンカーオリゴDNAと反応させることにより単分散性に近い分子量分布を持ち、オリゴDNAの担持率が0.03mol%であるDNAコンジュゲート(Poly)を構築した。本年度においては、前年度に合成したPolyの分離能を、ラジカル開始溶液重合により合成したオリゴDNA担持率および分子量がほぼ同じであるDNAコンジュゲート(Poly-R)と比較することにより検討した。モデルオリゴDNAとして完全に相補的塩基対を形成するAAAAAAAA(PM)とそのSNP体であるAAAATAAA(SN-1)およびAAAAAATA(SN-2)を用いた。溶離液としてpH7.4のTB溶液を用いた場合、いずれのDNAコンジュゲートを用いてもPMとSN-1とを分離することができたが、PMとSN-2とを分離することはできなかった。そこで、TB溶液にMgCl_2を75μmol添加したところ、PolyではPMとSN-2とを明確に分離することが可能であったが、Poly-Rの場合はPolyの場合に比べて明らかに分離が不十分であった。以上の結果より、メカノケミカル固相重合により構築したDNAコンジュゲートの方がより高い分離能を示し、本方法により合成したDNAコンジュゲートが単分散性に近い分子量を持つことに加え、重合法の違いによる高分子構造(モノマーシーケンス)の差異が高分離能の要因である可能性が示唆された。

最近已经揭示了使用DNA偶联物的毛细管电泳，其中寡聚物与聚合物的侧链结合，可用作基于基因序列中单个碱基突变的多态性分析方法（SNP）分析方法。这项研究旨在通过机械化学固态聚合构建DNA结合物，并以更高的分辨率发展DNA偶联物。在上一年中，通过这种聚合方法合成了丙烯酰胺和甲基丙烯酰琥珀酰基的共聚物，并与5'-氨基链核酸寡菌反应，形成DNA结合物（poly）与接近单差异的分子量分布和少量的0.03 mol％的寡素体的支撑率。在今年，通过将其与自由基启动溶液聚合合成的DNA结合物（poly-R）进行比较，研究了上一年中聚合成的分离能力。作为模型寡核DNA，使用了完全互补的碱基对的AAAAAAA（PM），其SNP形式为AAAATAA（SN-1）和AAAAAATA（SN-2）。当将pH 7.4的结核病溶液用作洗脱液时，可以使用任何DNA结合物将PM和SN-1分开，但是无法分离PM和SN-2。因此，将75μmol的MGCL_2添加到TB溶液中，并且Poly能够明确分离PM和SN-2，但是与Poly-R相比，Poly-R在分离中显然不足。 The above results suggest that the DNA conjugate constructed by mechanochemical solid-phase polymerization exhibits higher resolution, and that in addition to the fact that the DNA conjugate synthesized by this method has a molecular weight close to monodisperse, it is also possible that the difference in polymer structure (monomer sequence) due to differences in polymerization methods is the factor in the high resolution.