造血器腫瘍の病態に関わる癌遺伝子、癌抑制遺伝子変異の解析

造血系统肿瘤病理相关癌基因及抑癌基因突变分析

基本信息

批准号：
03F03137
负责人：
室原豊明
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F03137/
关键词：
p57KIP2遺伝子 PAX4遺伝子 DNAメチル化 siRNA 癌遺伝子癌抑制遺伝子

项目摘要

造血器腫瘍における癌関連遺伝子の病態への関わりについてp57KIP2遺伝子,PAX4遺伝子を中心に解析した。p57KIP2遺伝子:当遺伝子はCDK inhibitorの一つであるが発癌における役割は明らかでない。我々はDNAメチル化により当遺伝子発現の抑制が起きていることを明らかにし、癌抑制遺伝子の候補であることを提唱した。今回我々はp57KIP2遺伝子の腫瘍形成への役割を総合的に理解する事を目的とした。p57KIP2遺伝子の転写調節領域の解析したところ転写開始の上流から-451〜-280bp部位が当遺伝子の転写調節に関与していた。この部位に結合する遺伝子の単離している。Hela細胞を用いsiRNA法により当遺伝子の発現をノックダウンした。当遺伝子が細胞増殖に対してどのような影響を与えるかをMTT解析にて検討したところ、蛋白量の減少に伴い細胞増殖を促進することが分かった。このことから当遺伝子が癌抑制遺伝子としての機能があることが示唆された。PAX4遺伝子:当遺伝子はホメオボックス遺伝子の一種であり、成熟した正常組織では一般に遺伝子発現は認められない。しかし造血器系細胞珠15種類中10珠に過剰発現を認めた。当遺伝子のプロモーター領域のDNAメチル化を解析したところ、脱メチル化の有無とPAX4遺伝子の発現には強い相関関係が存在することが分かった。これらの結果からPAX4遺伝子はプロモーター領域の脱メチル化により遺伝子の発現の制御が行われていることが示された。COBRA法を用いPAX4遺伝子のプロモーター領域のDNAメチル化状態を検討したところ正常リンパ球では脱メチル化は認められなかったが、44例の悪性リンパ腫患者検体中22例に脱メチル化が検出された。この脱メチル化は正常細胞では起らない異常な現象であり、悪性リンパ腫の病態に関与することが示唆された。PAX4遺伝子の細胞増殖に対する影響を検討するためにPAX4遺伝子の強制発現系を作成し、MTT解析を行ったところ細胞増殖を促進することが分かった。これらのことからPAX4遺伝子は癌遺伝子の候補であると考えられた。

主要使用p57KIP2和PAX4基因分析了癌症相关基因参与造血肿瘤的病理学。 p57KIP2基因：该基因是CDK抑制剂之一，但其在癌症中的作用尚不清楚。我们已经揭示了DNA甲基化会导致该基因表达的抑制，并提出它是肿瘤抑制基因的候选者。在这里，我们旨在全面了解p57KIP2基因在肿瘤发生中的作用。当分析p57KIP2基因的转录调节区域时，转录开始上游的-451至-280 bp位点与该基因的转录调控有关。与该位点结合的基因是分离的。使用HeLa细胞通过siRNA击倒该基因的表达。当我们使用MTT分析研究该基因对细胞增殖的影响时，发现细胞增殖是随着蛋白质含量降低而促进的。这表明该基因具有肿瘤抑制基因的功能。 PAX4基因：该基因是一种同源基因基因，在成熟的正常组织中通常不观察到基因表达。但是，在15种类型的造血有机金属珠中的10种观察到过表达。该基因启动子区域中DNA甲基化的分析表明，存在或不存在脱甲基化与PAX4基因的表达之间存在很强的相关性。这些结果表明，PAX4基因表达受启动子区域的脱甲基的控制。当使用COBRA方法检查PAX4基因的启动子区域的DNA甲基化状态时，在正常淋巴细胞中未观察到脱甲基化，但在44例恶性淋巴瘤患者中，有22例检测到脱甲基化。这种脱甲基化是一种异常现象，在正常细胞中不发生，并建议参与恶性淋巴瘤的病理。为了研究PAX4基因对细胞增殖的影响，创建了PAX4基因的强制表达系统，并进行了MTT分析以发现它促进了细胞增殖。这些发现表明PAX4基因是候选癌基因。