試験管内での視細胞の大量調整および選択的分離法の確立

体外大量制备和选择性分离感光细胞方法的建立

• 批准号: 03J00028
• 负责人: 柳 靖雄
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Research Institute, International Medical Center of Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J00028/
• 关键词: 幹細胞; 網膜

本年度は、まず、マウス、および、ラットを用いて成体眼球毛様体上皮よりスフェア法を用いて網膜幹細胞を取得する事に成功した。この幹細胞の性状を解析するために、まず、ラット胎生期(胎生14日齢)の前脳由来の神経前駆細胞と成体(6から8週齢)毛様体上皮由来網膜幹細胞の増殖能および分化能を比較検討した。その結果、網膜幹細胞は、胎生期の前能由来の神経幹細胞と比較してその増殖能は悪く、未分化な状態での細胞の維持が困難であるものの、前脳由来の神経幹細胞と異なり、感覚網膜細胞への分化能を有する事を免疫染色およびRT-PCRを用いて明らかとした。また、これらの幹細胞中に発現している遺伝子をRT-PCRで確認したところ網膜の幹細胞は前脳由来の幹細胞と異なり、網膜領域の決定遺伝子であるChx10や、Rxを発現する一方で、Pax2などの前脳得意的な遺伝子は発現していない事が明らかとなり、網膜幹細胞の特異性は、このような内在性の因子によって決定されている可能性が明らかとなった。さらに、より大型棒物であり、移植実験などに使用が容易である家兎を用いて同様の網膜前駆細胞を取得する事に成功した。更に、培地にメチルセルロースを添加する事によって、ほとんど細胞凝集がなく、網膜前駆細胞を単一細胞から培養し、個々の網膜前駆細胞の増殖分化能を検討する系を確立した。その結果、家兎の成体毛様体から取得される網膜前駆細胞は約20%が2分化能以上を有する細胞である程度未分化で増殖能があるもののあるものの、残りの80%はほとんどグリア系の細胞へと分化し、増殖能力も限られた細胞である事が明らかとなった。

This year, we have successfully used the adult eyeball hair, the body epithelium, and the Internet network cell to achieve success in this year. An analysis of the characteristics of the fetus (14 days after birth) the origin of the hair epithelium of the preectocele (6-8-year-old) is the origin of the epithelium of the trichoderm. The differentiation of the epithelium of the mesenteric cells can be compared with that of the mother. The results of the experiment, the cellular differentiation of the reticular membrane, the cellular differentiation of the preprenatal cell, the comparative colonization of the fetal cell, the maintenance of the undifferentiated status cell, the cellular differentiation of the epigenetic cell, and the immunoreaction immunostaining assay of RT-PCR. In the cell, you can see that the RT-PCR is responsible for confirming the origin of the subscriber, the domain of the network, the Chx10, the Rx, the Pax2, the user, the user The intrinsic factor determines the possibility of the internal factor. It is easy to use large-scale bars and transplant devices to make sure that you can use the same pre-network cell to make sure that you are successful. In other words, we need to add cell culture, cell agglutination assay, cell culture and cell differentiation to ensure the establishment of the cell culture system. The results showed that about 20%

项目成果

Kadonosono K, Yanagi Y: "Reply to the letter by C. Haritoglou et al.: Indocyanine green-assisted vitreomacular surgery : adverse effects."Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 241. 959-960 (2003)

Kadonosono K、Yanagi Y：“回复 C. Haritoglou 等人的来信：吲哚菁绿辅助玻璃体黄斑手术：不良反应。”Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol。

Yanagi Y, Tmaki Y, Fukushima H: "Fine retinal crystalline deposits observed by confocal scanning laser ophthalmoscopic examination using infrared light."Br J Ophthalmo. 87. 519-520 (2003)

Yanagi Y、Tmaki Y、Fukushima H：“使用红外光通过共焦扫描激光检眼镜检查观察到细小的视网膜结晶沉积物。”Br J Olookingmo。

Yanagi Y, Tamaki Y, Takahashi H, Sekine H, Mori M, Hirato T, Okajima O: "Clinical and functional findings in crystalline retinopathy"Retina. 24. 267-274 (2004)

Yanagi Y、Tamaki Y、Takahashi H、Sekine H、Mori M、Hirato T、Okajima O：“结晶性视网膜病变的临床和功能发现”视网膜。

Kawase Y, Yanagi Y, Fujimoto M, Takato T, Okochi H: "Characterization of multipotent stem cells from the skin : Transforming growth factor (TGF)-β facilitates the cell growth."Exp. Cell Res. 295. 194-203 (2004)

Kawase Y、Yanagi Y、Fujimoto M、Takato T、Okochi H：“皮肤多能干细胞的表征：转化生长因子 (TGF)-β 促进细胞生长。”Exp. Cell Res。 2004）

Yanagi Y, Tmaki Y, Inoue Y, Obata R, Muranaka K, Homma N: "Subconjunctival doxifluridine administration suppresses rat choroidal neovascularization through activated thymidine phosphorylase"Invest Ophthalmol Vis Sci. 43. 3495-3499 (2003)

Yanagi Y、Tmaki Y、Inoue Y、Obata R、Muranaka K、Homma N：“结膜下多西氟尿苷给药通过激活的胸苷磷酸化酶抑制大鼠脉络膜新生血管形成”Invest Ophasemol Vis Sci。