アスパルターゼ機能発現部位における構造変化機構の解明

阐明天冬氨酸酶功能表达位点的结构变化机制

• 批准号: 15780069
• 负责人: 藤井 知実
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15780069/
• 关键词: 構造生物学; X線結晶解析; アスパルターゼ; 耐熱性; 立体構造; 結晶構造

中等度好熱菌Bacillus sp.YM55-1由来アスパルターゼの精密分子構造と類縁酵素の分子構造とを局所構造比較の手法により比較し、検出した構造差異領域についての検討を行った。大腸菌由来アスパルターゼにおけるアスパラギン酸とマグネシウムイオンによる酵素反応へのアロステリック効果発現に関与している可能性が示唆された2箇所の領域については、具体的な構造変化機構の詳細は不明ではあるが、構造変化の活性部位への伝搬や、活性部位クレフトの空間体積の増減などが関与していると推定される。さらに、Bacillus sp.YM55-1由来アスパルターゼの基質分子結合モデルと類縁酵素の基質フリー構造および基質類似物結合複合体構造との詳細な構造比較を行うことにより、酵素反応遂行のために重要な役割を担っていると示唆されるフレキシブルなループ中のセリン残基が、活性部位中での基質分子との相互作用に重要な働きを担っている可能性が強く示唆された。また、基質結合状態の疑似構造を形成していると期待される基質類似物複合体結晶を得ることを目的として、基質類似物十数種類との共存下での結晶化の条件検索の検討を行った。局所構造比較手法の妥当性の検討のため、他の幾つかのマルチサブユニット形態のタンパク質について、状態の異なる同一分子の結晶構造での構造差異に対して同様の手法による局所構造比較を行ったところ、局所的な構造変化部位を明確に検出することが可能であるという予備的な結果を得ることができた。

Bacillus, a moderately thermophilic bacterium The origin of sp.YM55-1 is the precise molecular structure and molecular structure of enzyme-like enzymes. The method of comparing the structure of the bureau is the comparison method, and the field of structural differences is the difference field. The origin of coliform bacteria The area of ​​the actual situation of the original effect and the probability of the しているについては、Details of the specific なstructural change mechanismのUnknownではあるが、Structural change のactive partへの伝movable, active part クレフトのSpace volume のincrease and decrease などが关 and しているとESTIMATE される.さらに、Bacillus sp.YM55-1 is derived from the matrix molecule-binding enzyme-like enzyme matrix structure. Structure of Matrix Analog Binding Complex and Comparison of Structure and Enzyme Reactionのためにimportant なservice cutter danっているとshows 唆されるフレキシブルなループ中のセリン residue が, The interaction between the matrix molecules in the active site is important and the possibility is strong.また、The suspected structure of the matrix-bound state is formed and the crystallization of the matrix analog complex is expected. The conditions for crystallization are determined by the coexistence of dozens of types of substrate analogues and the purpose of the research. The appropriateness of the comparison method of bureau structure. The difference in the form and quality of the same molecule and the difference in the crystal structure of the same molecule.対して同様のtechniqueによるbureau structure comparisonを行ったところ、bureau's structural change part It is clear that the result of the preparation is the result of the preparation.