肝癌免疫遺伝子治療ウイルスベクターの基礎的研究

肝癌免疫基因治疗病毒载体基础研究

基本信息

  • 批准号:
    15790343
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.24万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2003
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2003 至 2004
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本年度はレンチウイルスに関する研究を中心に研究を進めた。HBVの表面蛋白を発現するベクターとしてS蛋白のS, M, Lに対応するベクターを作製した。HBVウイルスではこれらの蛋白が一定の比率で表面蛋白を構成していることが知られているため、これらの蛋白の比率を変えて検討した。またHCVに関してはE12, E1p7, E2, E2p7のそれぞれの組み合わせの共感染とE12,E1p7の単独感染にてウイルスを作製して検討した.またこれらの蛋白の発現についてはHBVに関しては市販のHBs抗体を用いたWestern blotを用い,HCVに関してはT7を用いたin vitro transcription and translationにて確認したところ良好な蛋白発現がみられた.これらの系を用いレンチウイルスベクターを作製したがこれらのベクターでのレポーター遺伝子の発現は認められなかった.今回検討したHBV, HCVいずれも培養細胞感染系が一般的ではなく,その検出感度も低いため培養細胞系への感染実験システムが確立されているダックB型肝炎ウイルス(DHBV)を用い検討した.HBVと同様にpreSとS蛋白を発現するベクターを作成して,その蛋白発現をウエスタンブロットにて確認した.その後ダック肝細胞の初代培養細胞を作製し,これらの細胞に作製したウイルス感染させluciferase assayにて検討した.コントロールのVSV-Gの表面蛋白を有するウイルスでは良好な発現を確認できたが,DHBV S蛋白を表面に発現するウイルスとその組み合わせでは発現は確認できなかった.これらの検討でレンチウイルスのパッケージを含めた更なる検討が必要であると考えられた.
This year's research center HBV surface protein expression is regulated by S, M, L protein expression. HBV protein composition is determined by the ratio of protein to protein. HCV infection is related to E12, E1p7, E2, E2p7 and co-infection and E12, E1p7 and co-infection. Western blot was used to detect HBV,HCV and HBs in vitro transcription and translation. This is the first time that the Chinese government has made a decision on whether to use the Chinese government to make a decision on whether to use the Chinese government to make a decision. In this study, HBV and HCV infection in cultured cell lines was generally detected, and the sensitivity was low. The infection status of cultured cell lines was established. Hepatitis B virus (DHBV) was detected. HBV preS protein expression was established and confirmed. The primary culture cells of the liver cells were prepared, and then the cells were infected with the luciferase assay. It is confirmed that DHBV S protein is well developed on the surface of VSV-G protein. This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with someone else.

项目成果

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