78個の毛髪ケラチン付随タンパンKAP遺伝子の転写機構の解明

阐明78个毛发角蛋白相关蛋白KAP基因的转录机制

• 批准号: 15790598
• 负责人: 大林 泉
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790598/
• 关键词: 毛髪ケラチン付随タンパク遺伝子; 角化細胞; 毛乳頭細胞; ケラチン中間径線維遺伝子; 転写調節因子

毛髪ケラチン付随タンパク(KAPs)遺伝子群の発現に関わる転写調節因子の同定と、発現調節機構を解明することを目的として下記の研究を実施した。1.毛細胞に優位に発現している転写因子(Foxn1,Hairless,Lef-1)のcDNAをクローニングし、HeLa細胞に導入・強制発現させることで各KAP遺伝子の発現が誘導されるか否かを調べたところ、Foxn1の強制発現によりII型ケラチン中間径線維(KIF)遺伝子であるKRTHB3,KRTHB5遺伝子およびHGT(high-glycine-tyrosine)型のKAP遺伝子であるKRTAP7-1遺伝子の発現が顕著に誘導された。また、Lef-1の強制発現細胞では、KRTHA5,KRTAP13-1遺伝子の弱い発現増加が認められた。2.毛包は外胚葉(角化細胞)・中胚葉(毛乳頭細胞)の相互作用により形成される。正常ヒト毛乳頭細胞と重層培養することによって正常ヒト角化細胞の毛細胞への分化すなわちKIF、KAP遺伝子など毛髪特異的遺伝子の発現誘導を試みた。しかし、細胞分化の最終段階で発現するとされるKAP/KIF遺伝子群の発現が認められなかった。このことは、細胞培養系では組織で起こっているような細胞分化が再現できていないためであると考えられた。3.そこで毛組織における機能を解析するためマウスから毛細胞を採取し、パピローマウイルス16型由来のE6,E7断片を持つ組換えアデノ随伴ウイルスを感染させ、毛乳頭細胞および毛母細胞の不死化細胞株の樹立を試みたが、不死化細胞株は得られなかった。

The research on the identification of regulatory factors and the interpretation of regulatory mechanisms in the development of KAPs has been carried out. 1. Hair cells are optimized for the development of writing factors (Foxn1,Hairless,Lef-1) cDNA is introduced into HeLa cells and expressed under stress. The expression of each KAP gene is induced. The expression of Foxn1 gene under stress is regulated. The expression of Foxn1 gene under stress is type II. The expression of KIF gene is KRTHB3. KRTHB5 gene and HGT(high-glycine-tyrosine) type KAP gene were induced by KRTAP7-1 gene. The expression of KRTHA5,KRTAP13-1 gene in stress-resistant cells increased. 2. The interaction between ectoderm (keratinized cells) and mesoderm (dermal papilla cells) forms the trichomes. The differentiation of hair cells from normal dermal papilla cells and keratinocytes was studied by KIF and KAP gene expression and hair specific gene expression. KAP/KIF gene subset is identified during the final stage of cell differentiation. The cell culture system was developed and differentiated. 3. Analysis of hair tissue function, hair cell selection, hair papilla cell selection, hair cell type 16 origin, E6,E7 fragment selection, hair papilla cell selection, hair cell immortalization, hair cell immortalization, hair cell immortalization.