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マイクロチップ電気泳動によるタンパク質およびペプチドの高感度・高選択性分析法の開発

开发利用微芯片电泳进行蛋白质和肽的高灵敏度和高选择性分析方法

基本信息

批准号：
04F04381
负责人：
寺部茂
金额：
$ 1.15万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度11月末から研究を始めたばかりであるが、二つの実験を並行して進めている。マイクロチップ電気泳動を行うための準備段階としてキャピラリー電気泳動(CE)を用いて研究を進めている。一つはCEを利用した溶液中での結合定数の測定法に関する研究である。結合定数、とくにタンパク質と薬物との結合定数の測定法は種々報告され、また広く利用されている。CEによる結合定数決定法としては主にアフィニティー電気泳動が利用されている。この方法は、試料消費量が少ない、純粋な試料が必要ではない、短時間で測定可能等の利点がある。一方、結合平衡が迅速に成り立つ必要がある。それに比べて、先端分析CEでは平衡状態にある溶液を電気的に連続的にキャピラリー内に導入して行う方法で、目的試料の結合体と非結合体の濃度を正確に測定できるのが特徴である。マイクロチップ電気泳動では分離時間が短く、使用する溶液量も少ないので先端分析法が適していると考えられる。そのために、CEによる予備実験を行った。UV吸収のない化合物の結合定数は普通のCE装置では検出ができないので間接的測定法を開発した。シクロデキストリン(CD)との結合定数測定をモデルにして実験を行った。CDとナフタリンスルホン酸(NSA)との混合物を用いて先端分析CEにより結合定数を測定した。次に、CDとNSAの混合物にさらに結合定数を測定しようとする化合物(たとえばフェノール)を添加して、CDに対してNSAとフェノールとを競争的に結合させ、NSAの結合定数を測定すると、計算からフェノールの結合定数も算出可能であることを実証した。もう一つの実験はタンパク質のCE-MS分析に関する研究で、ペプチドの電気泳動移動度はその等電点(pI)により大きく変化する特性を利用して、試料溶液のpHを最適化するとスルホン化ペプチドのみを他のペプチドから選択的にキャピラリーに電気的に濃縮導入することができることをCE-MSにより実証中である。

At the end of November this year, the research began, and the second research began. The preparation stage of electromigration (CE) is studied. A study on the determination of binding number in solution by CE Determination of binding number, quality of compound and binding number are reported and utilized. The method of determining the number of combinations of CE and CE is used to determine the number of combinations of CE and CE. This method has advantages such as small sample consumption, pure sample, short time, etc. One side, the combination of balance quickly into the necessary The concentration of the conjugate and non-conjugate of the target sample is accurately measured. The separation time is short, the amount of solution used is small, and the analytical method is suitable.そのために、CEによる予备実験を行った。The binding determination of UV absorption compounds was developed by indirect determination method instead of conventional CE apparatus. The number of combinations of CD's and CD's is determined by the number of combinations of CD's. CD and NSA were used to determine the binding capacity of the mixture. Second, CD and NSA mixture determination of binding number, calculation of binding number. In the study of CE-MS analysis, the isoelectric point (pI) of the sample solution was optimized, and the concentration of the sample solution was introduced.