肝組織特異的なルシフェラーゼ発現トランスジェニックラットの開発

表达肝组织特异性荧光素酶的转基因大鼠的发育

• 批准号: 04J53032
• 负责人: 佐藤 友紀
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J53032/
• 关键词: トランスジェニックラット; ルシフェラーゼ; GFP; マーカー遺伝子

マウスアルブミンエンハンサー、プロモータにルシフェラーゼ遺伝子をつないだコンストラクトを用い、LEWラット胚にマイクロインジェクションを行い、Alb-Luciferase transgenic ratの作製を試みた。マイクロインジェクションによる導入遺伝子の染色体へのインテグレーションはバイチャンスであるので、本トランスジェニックラットの作成に関しては、ライン確保が研究の律速段階となる。260個の注入胚のうち240個を移植胚として用い、29匹の産子が得られたが、すべてtransgene(-)であり、目的とするトランスジェニックラットを得ることができなかった。そこで、次に、自治医科大学分子病態治療研究センターにおいてすでに作製されたgreen fluorescent protein (GFP)トランスジェニックラットを用い、好中球可視化システムの開発を試みた。本トランスジェニックラットは好中球にマーカー遺伝子として強いGFPの輝度を持つ一方、肝臓においてはGFPの発現が低いという特徴をもつ。そこで、そのコントラストを利用し、高感度CCDカメラを用いて肝臓表面におけるin vivoでのリアルタイムの微小循環の観察を行った。従来の観察方法は色素を用いて血球系をラベルすることが多かったが、本方法の開発により、より簡便かつ人為的操作の少ない状態での評価が可能となり、さらに、臓器障害モデルにおける薬効評価などにも汎用性が広いと考えている。なお、先に述べたトランスジェニックの作成に関しては、別にユビキタスなプロモータであるRosaプロモータにルシフェラーゼ遺伝子をつないだコンストラクトを用いたRosa-luciferase transgenic ratの作製も行った。252個の注入胚のうち227個を移植胚として用い、103匹の産子が得られた。このうち4匹がtransgene(+)であり、全身性にルシフェラーゼ遺伝子の良好な発現が得られていることから、今後は本Tgラットの解析等も行っていきたいと考えている。

In addition, the production of Alb-Luciferase transgenic rat was also tested. The chromosome sequence of the introduced gene is related to the preparation of the chromosome sequence of the introduced gene. 260 of the injected embryos were used, 240 of the transplanted embryos were used, 29 of the embryos were produced, and the transgene(-) was obtained. The research on molecular pathology therapy of Jiji Medical University was carried out in the field of green fluorescent protein (GFP). The main characteristics of GFP are: high GFP brightness, low GFP brightness, and low GFP brightness. The use of high-sensitivity CCD sensors in the detection of micro-circulation on liver surfaces in vivo The present method for detecting the presence of pigment in the blood cell system is simple and easy to develop, and can be used for evaluating the human operation and the state of the human body. In addition, the Rosa-luciferase gene is used to produce the Rosa-luciferase gene. 252 embryos were transferred, 227 embryos were used, and 103 embryos were produced. The 4-bit transgene(+) is a good indicator of the occurrence of the disease, and the analysis of the disease in the future.

项目成果

Development of new inbred transgenic strains of rats with LacZ or GFP

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.01.132
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Inoue, H;Ohsawa, I;Kobayashi, E
• 通讯作者: Kobayashi, E

Gene silencing in rat liver and limb grafts by rapid injection of small interference RNA

通过快速注射小干扰RNA使大鼠肝脏和肢体移植物中的基因沉默

• 发表时间: 2005
• 期刊: Transplantation 79(2)
• 作者: Sato Y;Ajiki T;Inoue S;Fujishiro J;Yoshino H;Igarashi Y;Hakamata Y;Kaneko T;Murakami T;Kobayashi E
• 通讯作者: Kobayashi E

Leukocytes with bright fluorescence in rats

大鼠白细胞发出明亮的荧光

• 发表时间: 2005
• 期刊: Anesth Analg 100(4)
• 作者: ^*Sato A;^*Sato Y;Sato Y;Sohara Y;Seo N;Kobayashi E
• 通讯作者: Kobayashi E

Can a bone marrow cells contribute to organ regeneration? -In vivo analysis using transgenic rats with reporter genes-

骨髓细胞可以促进器官再生吗？

• 发表时间: 2005
• 期刊: Transplant Proc (in press)
• 作者: Sato Y;Matsui K;Ajiki T;Igarashi Y;Takahashi M;Murakarni T;Hakamata Y;Tabata Y;Kobayashi E
• 通讯作者: Kobayashi E