ヒト歯根膜組織の非石灰化機構へのアポトーシスとメカニカルストレスの関与究明

细胞凋亡和机械应力参与人牙周膜组织非矿化机制的研究

• 批准号: 15791244
• 负责人: 富田 浩一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791244/
• 关键词: ヒト歯根膜細胞; メカニカルストレス; アポトーシス; 非石灰化

1.ヒト歯根膜細胞の培養健常人の矯正学的理由で抜歯した小臼歯2本より、無菌的にヒト歯根膜組織を摘出し、10%ウシ胎児血清を含むα-MEM(α-modified minium essential medium)培地にて37℃、5%CO2インキュベータ内でタイプIコラーゲンコート培養皿FLEX-II上で10代まで継代培養を行った。2.メカニカルストレスの負荷メカニカルストレスを負荷する前に、タイプIコラーゲンコート培養皿FLEX-I上でコンフルエントになるまで培養したヒト歯根膜細胞を、1%ウシ胎児血清を含むα-MEM培地にて37℃、5%CO2インキュベータ内で1日培養し、Flexercell Strain Unitに設置し、FLEX-Iの底面が10%、5%の伸張率になるように設定し、培地は1%ウシ胎児血清を含むα-MEMを2日ごとに交換し、ヒト歯根膜細胞に5日間のメカニカルストレスを負荷した。コントロール群には、メカニカルストレスを負荷せず静置培養したヒト歯根膜細胞を用いた。3.アポトーシスに関係するタンパクの検出メカニカルストレス負荷終了した培養皿から上清を回収し、アポトーシスの開始に関与するといわれているデスレセプターであるFAS、FASリガンド、アポトーシスの実行に関与するといわれているカスパーゼタンパクについてELISA法にて検出を試みたが、培養皿の底面の伸張率に対応した明確な発現はみられなかった。4.転写因子の活性化メカニカルストレス負荷終了した細胞から核タンパクを抽出し、転写因子であるAP-1、SP-1、NF-κBの活性化をゲルシフト法にて調べた結果、メカニカルストレスを負荷したヒト歯根膜細胞にてNF-κBの活性化がみられた。

1. The reason for the culture of dental root membrane cells in healthy human orthopaedics is that the dental root membrane tissue was extracted from the dental root membrane tissue and 10% of it was isolated from fetal serum containing α-MEM(α-modified minimum essential medium) at 37℃ and 5% CO2. 2. The load of flexercell strain was measured before and after the load was measured. FLEX-I was cultured on a FLEX-I culture plate. The root membrane cells were cultured in a 1% fetal serum containing α-MEM at 37℃ and 5% CO2. The strain was cultured for 1 day. Flexercell Strain was set at 10% and 5% of the FLEX-I base. 1% of the fetal serum contains α-MEM, and the root membrane cells contain α-MEM. The root membrane cells were cultured under static conditions. 3. The relationship between FAS, FAS and the start of the culture process is the relationship between FAS, FAS and the start of the culture process. The elongation of the bottom surface of the culture dish is clearly visible. 4. The activation of AP-1, SP-1 and NF-κB in root membrane cells was regulated by different methods.