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ホスホリパーゼA_2経路により産生される新規生理活性脂質の同定とその作用機構の解明

磷脂酶A_2途径产生的新型生物活性脂质的鉴定及其作用机制的阐明

基本信息

批准号：
16790062
负责人：
桑田浩
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

12/15-LOX過剰発現細胞をIL-1β/TNFαで刺激後、細胞を回収し、これらの試料からBligh & Dyer法によって総脂質を抽出し、この総脂質をSep Pak Silica固相抽出カラムを用いて各リン脂質サブクラスに分離後、得られた画分のsPLA_2-IIA発現に対する効果を検討した。その結果、sPLA_2-IIA発現を誘導する脂質(Lipid X)は、ホスファチジルコリン(PC)を含む画分のみに存在することが明らかとなった(なお、以降の検討ではこのPC画分をLipid Xとして用いた)。昨年度の検討で、Lipid Xは、PLCあるいはPLD処理により、ジアシルグリセロール型やホスファチジン酸型に変換しても活性が保持されること、PLA_2処理後、Bligh & Dyer法により抽出した脂質画分中にその活性がほとんど検出できないことを明らかとした。そこで、後者についてより詳細に検討するために、Lipid X画分をPLA_2処理後、本反応液を直接Sep Pak C18固相抽出カラムに添加後、各種溶媒を用いて脂質を溶出した。その結果、sPLA_2-IIAの発現を誘導する脂質がベンゼンを溶媒として用いることによって回収できることが明らかとなった。また、陰性対照としてLipid Xの調製時に同時に得られたホスファチジルエタノールアミン画分を用いて同様の検討を行った結果、sPLA_2-IIAの発現誘導を引き起こす活性は検出されなかった。以上の結果より、Lipid Xのsn-2位に結合している脂肪酸は、通常の脂肪酸とは異なり、Bligh & Dyer法では抽出効率が非常に悪い性質(親水性が高い可能性を考えている)を有し、且つ、この脂肪酸はPCに特異的に結合している可能性が示唆された。

12/15-LOX over-expression cells stimulated with IL-1β/TNFα, cell recovery, sample separation by Bligh & Dyer method, lipid extraction by Sep Pak Silica solid phase extraction, separation of lipids, and results of sPLA_2-IIA production were investigated. As a result, sPLA_2-IIA production is induced by lipid (Lipid X), lipid (PC), and lipid (Lipid X). In the past year, Lipid X and PLC were analyzed, and the activity of acid type was maintained after PLD treatment. After PLA_2 treatment, Bligh & Dyer method was used to extract lipid fraction. After treatment with PLA_2, the reaction solution was extracted directly from SepPak C18 and added with various solvents. As a result, sPLA_2-IIA production was induced by lipid and solvent. The results of the same analysis and the induction of sPLA_2-IIA were obtained when the modulation of Lipid X was carried out. The above results show that the fatty acids bound at sn-2 position of Lipid X are different from the normal fatty acids, and that the extraction efficiency by Bligh & Dyer method is very high.

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Group IIA secretory phospholipase A2 is a unique 12/15-lipoxygenase-regulated gene in cytokine-stimulated rat fibroblastic 3YI cells.

IIA 组分泌性磷脂酶 A2 是细胞因子刺激的大鼠成纤维细胞 3YI 细胞中独特的 12/15-脂氧合酶调节基因。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Biochim Biophys Acta 1686(1-2)
影响因子：
0
作者：
Funakoshi E.;Hamano A.;Fukui M.;Nishiyama N.;Ogita K.;Shimizu N.;Ito F.;Funakoshi E.et al.;H.Kuwata et al.;M.Murakami et al.;H.Kuwata et al.
通讯作者：
H.Kuwata et al.

Search of factors that intermediate cytokine-induced group IIA phospholipase A_2 expression through the cytosolic phopholipase A_2- and 12/15-lipoxygenase-dependent pathway.

通过胞质磷脂酶 A_2 和 12/15 脂氧合酶依赖性途径，寻找介导细胞因子诱导的 IIA 族磷脂酶 A_2 表达的因子。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Biol.Chem. 280
影响因子：
0
作者：
Funakoshi E.;Hamano A.;Fukui M.;Nishiyama N.;Ogita K.;Shimizu N.;Ito F.;Funakoshi E.et al.;H.Kuwata et al.
通讯作者：
H.Kuwata et al.

Group VIBCa2+-independent phospholipase A2γ promotes cellular membrane hydrolysis and prostaglandin production in a manner distinct from other intracellular phospholipases A2