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トリパノソーマの生命維持に必須な新規低分子膜蛋白質の機能解析

锥虫生命维持所必需的新型低分子膜蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
16790248
负责人：
中村康男
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790248/
关键词：
トリパノソーマシグナルシークエンストラップ dsRNAi 膜蛋白質

项目摘要

前年度の結果、トリパノソーマの新規低分子膜蛋白質が蛍光抗体法により細胞膜に局在していることが予想される像が得られた。そこで、細胞膜をビオチン化し免疫沈降を用いてこの蛋白質が膜に局在していることを証明するための実験を行なった。一般的なリジンを用いたビオチン化ではこの蛋白質を免疫沈降することが出来なかった。これはC末端側にリジンが存在しないためビオチン化が起こっていないのが原因と予想される。また、C末端側にはシステインも存在しないため、カルボキシル基を利用したビオチン化を試みたが、架橋剤による凝集反応のため上手く行かなかった。現在、糖鎖を用いたビオチン化で膜蛋白であることを証明しようと試みている。また、この蛋白質に結合している蛋白質を免疫沈降で落とすことを試みた。C末端領域にFLAG、myc、HAなどの数種類のタグを付けたリコンビナント蛋白質をトリパノソーマおよびHEK293細胞に発現させたが、どれも細胞可溶化液がウエスタンブロットで反応を示さなかった。これはC末端に存在する2つのプロリンによりタグが蛋白質の内側に折り込まれマスクされてしまうことが原因であると推測される。これらに加え、昆虫型のトリパノソーマで行なっていた当教室で開発したテトラサイクリン誘導性のdsRNA発現ベクターを用いたRNAiを血流型のトリパノソーマで行なった。2種類のベクターのコンストラクトを遺伝子銃やエレクトロポレーションといった方法で導入したが、クローンを得る事が出来なかった。このことから昆虫型でも認められたようにプロモーターのリークにより少量でもRNAが抑制されるとトリパノソーマが生存出来ない事が予想される。このことよりこの低分子膜蛋白質は発現が少量ながらトリパノソーマの生存に重要な役割を果たしていると予想される。現在、siRNAを用いたRNAiを検討中である。

According to the results of the previous year, the results of the previous year showed that the new low molecular membrane proteins (LMMPs) were detected in the cell membrane by photoantibody method. The cell membrane was immunized and immunized. The protein was used to immunize the cell membrane. The general medicine is used to treat protein, immune deposition, immune deposition, protein, protein and protein. There is something wrong with the C terminal. The reason is that you don't want to. In the C-terminal, there are some problems, such as the use of the hardware, the anti-agglutination, the anti-agglutination, the anti-agglutination and the anti-agglutination. Now, the sugar is used to change the membrane protein. Immunoprecipitation test was performed by the combination of recombinant protein and immuno-protein. In the field of C-terminal FLAG, myc, HA, and so on, the number of cells in the C-terminal is very sensitive to the number of cells in the C-terminal, such as the number of cells in the C-terminal, such as FLAG, myc, and the number of cells in the C terminal. There is a reason for the presence of protein at the C-terminal of the C terminal. In addition, insect-based blood flow patterns can be detected in the classroom when the classroom is open and the dsRNA is used. It is possible to use the blood flow pattern in the classroom to detect the blood flow pattern. 2. Please do not know what to do. Please do not know how to do this. There is a small amount of RNA that can inhibit the insects from surviving to survive. Low molecular weight membrane proteins (LMMPs) have been found to be very important for survival. At present, siRNA is using the RNAi system in the middle of the day.