シグナルシークエンストラップ法を利用した新規癌マーカー抗体の作成

使用信号序列带方法创建新型癌症标志物抗体

• 批准号: 18659137
• 负责人: 北村 俊雄
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659137/
• 关键词: シグナルペプチド; 発現クローニング; レトロウイルスベクター; 抗原; 抗体

研究代表者らが開発したシグナルシークエンス法SST-REXを用いると、癌細胞由来の膜蛋白質および分泌蛋白質が、マウスIL-3依存性細胞株Ba/F3の細胞上に-種類ずつ発現する細胞カタログ(SSTクローンと呼ぶ)を作製することができる。SSTクローンを免疫すれば効率良くマウスモノクローナル抗体の作成が可能である。しかしながらSSTクローンにおける癌細胞由来分子の発現が低いので、昨年度はさらに効率良い系を構築するために、SSTクローン中でこれらの分子を強力なプロモーターによって発現させることを試みた。用いたプロモーターはCMV、EF1α、SRα、CAGである。これらのベクターは通常MLVのLTRの10-100倍の活性を有するが、SSTクローン(Ba/F3)ではMLVのLTRが一番強力であることが判明した。そこでSSTクローンにおける癌細胞由来分子の発現を高めるためにいろいろな試みをした。まず細胞を変えて行ってみたが、Ba/F3での発現がもっとも高いことが判明した。また、SSTクローンにヘルパーウイルスを一過性に発現させることによって、挿入されているウイルスを回収し回収したウイルスをNIH3T3あるいはBW5147に感染させることによって、癌細胞由来分子を高発現する細胞を作製することを試みたが、ウイルス回収が予想以上に効率が悪く、ここの方法論を改善する必要があることが分かった。次に、SSTベクター自身にIRES-puroを組み込み、SSTクローン樹立後にピューロマイシンで選択することにより癌細胞由来分子の発現を高めることを試みた。その結果発現量が50%程度上昇した。今後、SST-REXの方法そのものを改良することを計画している。

Research representatives ら が open 発 し た シ グ ナ ル シ ー ク エ ン ス method of SST t-rex を with い る と, cancer cell origin の membrane protein お よ び が secreted protein, マ ウ ス IL - 3 dependency cell lines Ba/F3 の cells に - type ず つ 発 now す る cells カ タ ロ グ (SST ク ロ ー ン と shout ぶ) を cropping す る こ と が で き る. SST ク ロ ー ン を immune す れ ば sharper rate good く マ ウ ス モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の made が may で あ る. し か し な が ら SST ク ロ ー ン に お け る cancer cell origin molecular の 発 now が low い の で, yesterday's annual は さ ら に い department working rate good を build す る た め に, SST ク ロ ー ン in で こ れ ら の molecular を powerful な プ ロ モ ー タ ー に よ っ て 発 now さ せ る こ と を try み た. CMV, EF1α, SRα, CAGである. こ れ ら の ベ ク タ ー は usually MLV の LTR の 10-100 times の activity を す る が, SST ク ロ ー ン (Ba/F3) で は MLV の LTR が a powerful で あ る こ と が.at し た. そ こ で SST ク ロ ー ン に お け る cancer cell origin molecular の 発 now を high め る た め に い ろ い ろ な try み を し た. Line を ま ず cells - え て っ て み た が, Ba/F3 で の 発 now が も っ と も high い こ と が.at し た. ま た, SST ク ロ ー ン に ヘ ル パ ー ウ イ ル ス を transient に 発 now さ せ る こ と に よ っ て, scions into さ れ て い る ウ イ ル ス を back 収 し back 収 し た ウ イ ル ス を NIH3T3 あ る い は BW5147 に infection さ せ る こ と に よ っ て, high molecular を cancer cell origin 発 now す る cells を cropping す る こ と を try み た が, ウ イ ル ス back 収 が to think above に sharper rate が 悪 く, こ こ を の methodology to improve す る necessary が あ る こ と が points か っ た. に, SST ベ ク タ ー itself に IRES - puro を group み 込 み, SST ク ロ ー ン set after に ピ ュ ー ロ マ イ シ ン で sentaku す る こ と に よ り cancer cell origin molecular の 発 now を high め る こ と を try み た. Youdaoplaceholder0 そ result occurrence volume が50% increase た た. In the future, the plan for the improvement of the SST-REX <s:1> method そ <e:1> を を する <s:1> とを る る る る る る る る る.

项目成果

Functional analysis of an activating receptor LMIR4 as a counterpart of an inhibitory receptor LMIR3.

激活受体 LMIR4 作为抑制性受体 LMIR3 的对应物的功能分析。

• 期刊: J. Biol. Chem. (In press)
• 作者: Baba T;Mimura J;Nakamura N;Harada N;Yamamoto M;Morohashi K;Fujii-Kuriyama Y.;沖 俊彦;中島 秀明;中島 秀明;福地 由美;川島 敏行;沖俊彦;中島秀明;小埜良一;浦野敦司;箕嶋幸範;小埜良一;伊沢 久未
• 通讯作者: 伊沢 久未

Rac and Nuclear Translocation of STAT Transcription Factors.

STAT 转录因子的 Rac 和核易位。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Methods in Enzymology 431
• 作者: Toshiyuki Kawashima,Ying Chun Bao,Yukinori Minoshima;Yasushi Nomura,Tomonori Hatori;Tetsuya Hori;TatsuoFukagawa;Toshiyuki Fukada;NorikoTakahashi;Tetsuya Nosaka;Makoto Inoue,Tomohiro Sato;Mutsuko Kukimoto-Niino,Mikako Shirouzu;Shigeyuki Yokoyama a;Toshiyuki Kawashima;Toshiyuki Kawashima and Toshio Kitamura;Toshiyuki Kawashima;渡辺 (大河内) 直子;山西 吉典;川島 敏行
• 通讯作者: 川島 敏行

Integrin αIIbβ3 induces the adhesion and activation of mast cells through interaction with fibrinogen.

整合素αIIbβ3通过与纤维蛋白原的相互作用诱导肥大细胞的粘附和激活。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J. Immunol. 176
• 作者: Baba T;Mimura J;Nakamura N;Harada N;Yamamoto M;Morohashi K;Fujii-Kuriyama Y.;沖 俊彦
• 通讯作者: 沖 俊彦

STAT3/5の活性化メカニズムと分子標的療法

STAT3/5激活机制及分子靶向治疗

• 发表时间: 2007
• 作者: 川島敏行;土屋秋穂;北村俊雄;川島敏行;北村 俊雄;北村 俊雄;北村 俊雄;渡辺(大河内)直子;川島敏行
• 通讯作者: 川島敏行

Immune suppressor factor confers stromal cell line with enhanced supporting activity for hematopoietic stem cells

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.11.146
• 发表时间: 2006-02-03
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Nakajima, H;Shibata, F;Kitamura, T
• 通讯作者: Kitamura, T