歯髄特異的・誘導性コンディショナルノックアウトマウスの開発〜導入ベクターの構築

牙髓特异性诱导条件敲除小鼠的研制-导入载体的构建

• 批准号: 16791160
• 负责人: 作田 哲也
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16791160/
• 关键词: 歯髄; コンディショナルノックアウト; Cre; マウス

本研究は、歯髄組織に特異的かつ薬剤誘導性のコンディショナルノックアウトマウスを作成することを最終的な視野に入れ、導入すべきCre発現ベクターを構築することを目的としている。昨年度は、候補となる遺伝子のプロモーターについて検討を行った。すなわち、マウス歯髄組織において強い発現が認められたdentin sialophosphoprotein(DSPP)に着目した。本年度は以下の実験を行った。まず、歯髄細胞から象牙芽細胞への分化系(アスコルビン酸とβ-グリセロリン酸の共刺激による細胞培養系)を用いてDSPPの遺伝子発現をreverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR)法で検討したところ、分化マーカーの1つであるアルカリフォスファターゼと共にDSPPの発現が増強した。以上の知見から標的とする遺伝子をDSPPとした。次に、Cre発現ベクターであるpBS185をヒト歯髄細胞株(LSC)にトランスフェクションし、Cre遺伝子の発現をRT-PCR法で確認した後、pBS185ベクターのヒトサイトメガロウイルスのプロモーターをマウスDSPPのプロモーター(約2.6kbp)と置換した。その後、構築したベクターを1.マウス線維芽細胞(L929) 2.LSC細胞 3.ヒト皮膚線維芽細胞(SF-MA) 4.ヒト肺線維芽細胞(MRC-5)にトランスフェクションし、Cre遺伝子の発現をRT-PCR法によって解析したところ、すべての細胞において弱い発現が認められ、歯髄細胞における特異的な発現が認められないという結果を得た。現在、1.マウスDSPPのプロモーターで領域をより長い約5kbpまで延長させること 2.ヒト歯髄細胞株ではなく、マウスの歯髄細胞株あるいはラットの歯髄細胞株(RPC-C2A)を用いることによって細胞特異性に関する検討を行っている。

In this study, the characteristics of the organization were analyzed. The purpose of this study is to make the most important information in the organization. This is the most important thing in this study. In this study, the characteristics of the organization in this study, the organization, the organization and the organization. Last year, I was waiting for you to tell me that you didn't know what you were going to do. The organization is strongly aware that the dentin sialophosphoprotein (DSPP) is looking at the target. This year, the following will be announced as follows. The differentiation of ivory buds was detected by DSPP (RT-PCR) method. The differentiation and differentiation of ivory buds were detected by the method of reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). I am aware of the above information. I don't know if I have a problem with DSPP. In the second step, Cre detected that the pBS185 cell line (LSC) had a positive cell line (LSC), and the Cre cell line had been confirmed by the RT-PCR method. After the confirmation by the RT-PCR method, the pBS185 cell line had been confirmed by the pBS185 method. After that, please tell me that you are going to have to pay a visit. The bud cell (L929) 2.LSC 3. The germ cell (SF-MA) 4. The lung line maintenance germ cell (MRC-5) was used to detect lung cancer, and the RT-PCR method was used to detect the difference between the two. The results showed that the results of the RT-PCR method showed that the results were satisfactory. At present, 1. In the field of DSPP, there is a long-term agreement on the extension of 5kbp 2. The cell line (RPC-C2A) was divided into two groups: the cell line, the cell line.