B細胞の変異能力を応用するタンパク分子進化システムの構築

应用B细胞突变能力的蛋白质分子进化系统的构建

基本信息

  • 批准号:
    05J03571
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.15万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2005
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2005 至 2006
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ニワトリB細胞株DT40の抗体遺伝子座に自発的に誘導されるDNA組換えを利用して、抗体タンパク、または異種のタンパク分子の機能改変を行い、機能的タンパクを創製できるシステムを構築する試みを行ってきた。これまでに、DT40のDNA組換えメカニズムを人為的にON/0FFを厳密に制御できるような細胞株である、DT40-SW細胞を樹立した。また、DT40の内因性の抗体遺伝子のみでなく、外来のタンパク遺伝子においても変異の導入を誘発できることを示した。そこで本年度はこのDT40-SW株を利用し、タンパク分子の分子進化が実現できるかどうかを検討するために、DT40の内因性の抗体タンパク分子を分子進化のターゲット分子とし、任意の特異性を持つ抗体分子が分子進化によって作製可能であるかの検討を行った。変異機能がONの状態で長期培養したDT40-SW細胞は、自らの抗体遺伝子に変異を誘発し続け、抗体遺伝子ライブラリーを構築することが期待できる。そこで変異機能がONの状態でおよそ1年半の間培養を続けることで、非常に多様なDT40-SW抗体ライブラリーを構築することができた。次に、構築した抗体ライブラリーから、モデル抗原であるハプテンNP(4-hydorxy-3-nitrophenylacetyl)に対する特異性を持つ抗体の取得を試みた。抗原を結合させたマグネティックビーズを用いることで、NPに結合できる細胞を単離することができ、その細胞の分泌する抗体の解析を行った結果、NPに対して高い特異性を有していることが分かった。以上の事より、DT40細胞を利用することで、任意の特異性を持った抗体タンパクを取得することが可能であることが確認できた。これらを応用することで、任意のタンパク分子の機能改変により、機能的タンパク分子を創製できる分子進化システムを構築することが可能であることが示唆された。
ニ ワ ト リ B cell lines DT40 の antibody heritage 伝 stroma に induced from 発 に さ れ る DNA group in え を using し て, antibody タ ン パ ク, ま た は heterogeneous の タ ン パ ク molecular の function change - を い, functional タ ン パ ク を created で き る シ ス テ ム を build す る try み を line っ て き た. こ れ ま で に, DT40 の DNA group in え メ カ ニ ズ ム を man-made に ON / 0 ff を 厳 dense に suppression で き る よ う な cell lines で あ る, DT40 - SW cell を set し た. ま た, DT40 の endogenous の antibody heritage 伝 son の み で な く, foreign の タ ン パ ク posthumous son 伝 に お い て も - different の import を 発 lure で き る こ と を shown し た. そ こ で this year は こ の DT40 - SW strains using を し, タ ン パ ク の molecules evolve が be presently で き る か ど う か を beg す 検 る た め に, DT40 の endogenous の antibody タ ン パ ク を molecules evolve の タ ー ゲ ッ ト molecular と し, arbitrary の specificity を つ antibody molecules が molecular evolution に よ っ て cropping could で あ る か の 検 for を line Youdaoplaceholder0. - state of different function が ON の で long-term training し た DT40 - SW cell は, since ら の antibody heritage 伝 son に - different を 発 lure し 続 け, antibody but 伝 ラ イ ブ ラ リ ー を build す る こ と が expect で き る. そ こ で - state of different function が ON の で お よ そ 1 and a half years to build を の 続 け る こ と で, very に others な DT40 - SW antibody ラ イ ブ ラ リ ー を build す る こ と が で き た. に, constructing し た antibody ラ イ ブ ラ リ ー か ら, モ デ ル antigen で あ る ハ プ テ ン NP (4 - hydorxy - 3 - nitrophenylacetyl) に す seaborne る specificity を hold つ antibodies の を try obtain み た. Antigen を combining さ せ た マ グ ネ テ ィ ッ ク ビ ー ズ を with い る こ と で, combined NP に で き る cells を 単 from す る こ と が で き, そ の の cells secrete す る antibody の parsing line を っ た results, NP に し seaborne て high い specificity を し て い る こ と が points か っ た. Above の matter よ り, を DT40 cells using す る こ と で, arbitrary の specificity を っ た antibody タ ン パ ク を obtain す る こ と が may で あ る こ と が confirm で き た. こ れ ら を 応 with す る こ と で, arbitrary の タ ン パ ク molecular の function change - に よ り, functional タ ン パ ク molecular を created で き る molecular evolution シ ス テ ム を build す る こ と が may で あ る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Genetic manipulation of an exogenous non-immunoglobulin protein by gene conversion machinery in a chicken B cell line
  • DOI:
    10.1093/nar/gnj013
  • 发表时间:
    2006-01-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    14.9
  • 作者:
    Kanayama, N;Todo, K;Ohmori, H
  • 通讯作者:
    Ohmori, H
変異機能のON/OFF制御可能なB細胞株を用いた抗体および変異タンパク質の作製システム
使用B细胞系的抗体和突变蛋白生产系统,可以控制突变功能的ON/OFF
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    大森 齊;藤堂景史;金山直樹
  • 通讯作者:
    金山直樹
Novel in vitro screening system for monoclonal antibodies using hypermutating chicken B cell library
  • DOI:
    10.1263/jbb.102.478
  • 发表时间:
    2006-11-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    2.8
  • 作者:
    Todo, Kagefumi;Miyake, Kenji;Ohmori, Hitoshi
  • 通讯作者:
    Ohmori, Hitoshi
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藤堂 景史其他文献

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  • 资助金额:
    $ 1.15万
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    24651090
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    2012
  • 资助金额:
    $ 1.15万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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    23659057
  • 财政年份:
    2011
  • 资助金额:
    $ 1.15万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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  • 批准号:
    407666-2011
  • 财政年份:
    2010
  • 资助金额:
    $ 1.15万
  • 项目类别:
    Research Tools and Instruments - Category 1 (<$150,000)
Creation of binding growth factors by molecular evolutionary engineering and their medical applications
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  • 批准号:
    22220009
  • 财政年份:
    2010
  • 资助金额:
    $ 1.15万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
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建立新型含单体生物聚合物的全生物合成系统作为酶进化工程的基础
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    2008
  • 资助金额:
    $ 1.15万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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