Evolutionary engineering of sesquiterpene synthases from basidiomycetous fungi

担子菌倍半萜合酶的进化工程

• 批准号: 22K19212
• 负责人: 一瀬 博文
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19212/
• 关键词: セスキテルペン合成酵素; 担子菌

本研究では、「生物は不都合な酵素活性を封印しながら進化した」という独自の仮説に基づき、「封印された酵素が逆進化すればユニークな機能を発現する」ことを実証してモノ創りバイオ技術に新しいコンセプトを提案する。具体的には、木材腐朽担子菌（キノコ）に由来するセスキテルペン合成酵素（STS）をひとつの実験例として、(i) ゲノムから転写されない、(ii) 転写されても正しく翻訳されない、(iii) 翻訳されても酵素活性を示さないSTS群を遺伝子工学的に改変して酵素機能の人為的発現を目指す。本年度は、担子菌Postia placentaおよびPhanerochaete chrysosporiumに由来する「ゲノムから転写されない休眠遺伝子」を標的とした酵素活性の復元を試みた。これまでに転写が確認されていないSTSのゲノムDNA配列を調製し、イントロン領域を人為的に除去して得たcDNAや、糸状菌Aspergillus nidulansに形質転換して得られたcDNAを用い、これらのSTSを酵母に異種発現させて酵素活性を追跡した。一連の研究から、P. chrysosporiumに由来する1種のSTSにおいてセスキテルペン骨格分子を産生させることに成功し、dauca-4(11),8-dieneの産生を可能とした。同化合物を与えるSTSは知られているものの、dauca-4(11),8-dieneおよびその誘導体の生物活性に関しては不明な点が多く、本研究で獲得した遺伝子およびその産物を利用した有用物質合成に興味がもたれる。一方、P. placenta STSの酵素活性復元には至っておらず、STS異種発現に利用する宿主微生物に変更を加えるなどの改良を施して目標達成を目指す。

This study で は, "is not the creature は な enzyme activity を seal し な が ら evolution し た" と い う の alone 仮 said に づ き, "seal さ れ が た enzyme reverse evolution す れ ば ユ ニ ー ク な function を 発 now す る" こ と を card be し て モ ノ gen り バ イ オ に new し い コ ン セ プ ト を proposal す る. Specific に は, foxy basidiomycete fungi (キ ノ コ) に origin す る セ ス キ テ ル ペ ン synthetase (STS) を ひ と つ の be 験 example と し て, (I) ゲ ノ ム か ら planning write さ れ な い, (ii) planning write さ れ て も is し く turn 訳 さ れ な い, (iii) Turn 訳 さ れ て を も enzyme activity in さ な い STS group を heritage 伝 sub engineering に change - し て enzyme function の man-made 発 now を refers す. This year は Postia, basidiomycete fungi placenta お よ び Phanerochaete chrysosporium に origin す る "ゲ ノ ム か ら planning write さ れ な い dormancy heritage 伝" を mark と し の た enzyme activity recovery を try み た. こ れ ま で に planning write が confirm さ れ て い な い STS の ゲ ノ ム DNA match column を し modulation, イ ン ト ロ を ン field artificial に remove し て have た cDNA や, si fungus Aspergillus Nidulans に form quality planning in し て have ら れ た cDNA を い, こ れ ら の STS を yeast に heterogeneous 発 now さ せ を て enzyme activity tracing し た. For の research か ら, p. chrysosporium に origin す る one の STS に お い て セ ス キ テ ル ペ ン bone molecular を produce さ せ る こ と に し, dauca success - 4 (11), 8 - diene の possible と を し た. With compound を and え る STS は know ら れ て い る も の の, dauca - 4 (11), 8 - diene お よ び そ の inductor の bioactive に masato し て は unknown な point が く more, this study で し た heritage 伝 son お よ び そ を の products using し た useful synthetic material interests が に も た れ る. Side, p. placenta STS の enzyme activity recovery に は to っ て お ら ず, STS heterogeneous 発 に now use す る host microbial に - more を plus え る な ど の improved を shi し て goal を refers す.

项目成果

子嚢菌を宿主とした担子菌二次代謝関連遺伝子の転写と成熟mRNAの合成

以子囊菌为宿主担子菌次生代谢相关基因的转录及成熟mRNA的合成

• 发表时间: 2023
• 作者: 庄嶋菜月;一瀬博文;北岡卓也
• 通讯作者: 北岡卓也