細胞内抗体を用いた新規抗ガン剤スクリーニング法の開発

利用细胞内抗体开发新型抗癌药物筛选方法

• 批准号: 05J11327
• 负责人: 井上 敦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J11327/
• 关键词: 細胞内抗体; 細胞走化性; 転移; hnRNP-K; VHH; ケモタキシス

本研究ではシングルドメインからなる抗体フラグメントであるVHHのライブラリーを作製し、その中からガン細胞の運動を阻害できるVHHをスクリーニングすることを目的とする。前年度までの研究によりガン細胞の運動を阻害できるVHH(VHH-47)を同定することに成功している。今年度はVHH-47と相互作用するタンパク質としてhnRNP-KというRNA結合タンパク質に着目し、ガン細胞の運動性との関連性をより具体的に明らかにすることに焦点を絞り研究を行った。hnRNPKはマルチファンクショナルなタンパク質であり、様々な生命現象に関わっていることが報告されている。まず初めにVHH-47とhnRNP-Kが相互作用することを免疫沈降実験を行うことで明らかにした。そして、VHH-47はhnRNP-Kの細胞内での局在の変化をもたらすことを細胞分画およびウェスタンブロッティングにより確認した。これまでhnRNP-Kは核内に多く存在し、細胞外からの刺激によってリン酸化修飾を受けることで核内から細胞質へと移動するということが報告されており、細胞内部のシグナルを伝達する重要なタンパク質であると考えられる。VHH-47はこのhnRNP-Kの細胞内部での移動を妨げることによってシグナル伝達を阻害している可能性が考えられる。RNAiによるノックダウン実験は細胞死を誘導してしまうことから解析が困難であった。これらのことから、hnRNP-Kは抗ガン治療の際の新しい標的となる可能性がある。また、hnRNP-Kの細胞質における蓄積量がガン細胞の運動性と相関関係にあることから、細胞質におけるhnRNP-Kを不活性化させる分子、もしくは細胞質への蓄積を抑えることができる分子を開発することができれば副作用の少ない抗転移治療薬として応用できるかもしれない。

This study で は シ ン グ ル ド メ イ ン か ら な る antibody フ ラ グ メ ン ト で あ る whether の ラ イ ブ ラ リ ー を as し, そ の in か ら ガ ン cells の movement を resistance against で き る whether を ス ク リ ー ニ ン グ す る こ と を purpose と す る. Before the annual ま で の research に よ り ガ ン cells の movement を resistance against で き る whether (whether - 47) with fixed を す る こ と に successful し て い る. Our は whether - 47 と interaction す る タ ン パ ク qualitative と し て hnRNP -k と い う rna-binding タ ン パ ク qualitative に mesh し, ガ の ン cell motility と の masato even sex を よ り specific に Ming ら か に す る こ と に focus を wring line り research を っ た. HnRNPK は マ ル チ フ ァ ン ク シ ョ ナ ル な タ ン パ ク qualitative で あ り, others 々 な life phenomenon に masato わ っ て い る こ と が report さ れ て い る. Early ま ず め に whether - 47 と hnRNP -k が interaction す る こ と を immune sink be 験 を line う こ と で Ming ら か に し た. そ し て, whether - 47 は hnRNP -k の intracellular で の bureau in の variations change を も た ら す こ と を cells points draw お よ び ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り confirm し た. こ れ ま で hnRNP -k は intranuclear に く し, more extracellular か ら の stimulus に よ っ て リ ン acidification modified を by け る こ と で intranuclear か ら cytoplasm へ と mobile す る と い う こ と が report さ れ て お り, intracellular の シ グ ナ ル を 伝 da す る important な タ ン パ ク qualitative で あ る と exam え ら れ る. Whether - 47 は こ の hnRNP -k の intracellular で の mobile を hinder げ る こ と に よ っ て シ グ ナ ル 伝 da を resistance against し て い る possibility が exam え ら れ る. RNAi に よ る ノ ッ ク ダ ウ ン be 験 は induced cell death を し て し ま う こ と か ら parsing が difficult で あ っ た. <s:1> れら <s:1> と と ら ら, hnRNP-K <s:1> anti-ガ <s:1> treatment <s:1> new <s:1> target となる possibility がある. ま た, hnRNP K の cytoplasm に お け る volume が ガ の ン cell motility と phase masato masato is に あ る こ と か ら, cytoplasmic に お け る hnRNP -k を not activeness さ せ る molecules, も し く は cytoplasm へ の accumulation を え suppression る こ と が で き る molecular を open 発 す る こ と が で き れ ば less side effects の な い resistance planning move treatment 薬 と し て 応 Use で で る る る る れな.