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分裂酵母における減数分裂特異的遺伝子群の発現制御機構

裂殖酵母减数分裂特异性基因的表达控制机制

基本信息

批准号：
05J50172
负责人：
張ヶ谷有里子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J50172/
关键词：
減数分裂分裂酵母 RNA結合タンパク質

项目摘要

真核細胞が増殖を停止し減数分裂を開始するプロセスは厳密に制御される必要があるが、その分子基板については未知の部分が多く残されている。分裂酵母においては、RNA結合タンパク質Mei2により、減数分裂開始および進行が制御されている。Mei2は、減数分裂期にMei2と直接相互作用するnon-coding RNA(meiRNA)をコードするsme2遺伝子座に一点の構造体を形成する(mei2ドット)。以前の研究により、Mei2の機能のひとつとして、体細胞分裂期において、減数分裂特異的mRNAの発現をシス配列DSRに依存して抑制しているRNA結合タンパク質Mmi1を不活性化することが明らかとなった。また、この不活性化はMei2がMmi1を核内の一点(Mei2ドット)に隔離することによってなされていることが細胞生物学的解析より示唆された。本年度は、この仮説のさらなる検証を目的として、Mmi1タンパク質の機能領域の決定をおこなった。1)体細胞分裂周期における減数分裂特異的mRNAの発現抑制に必須なMmi1の機能領域の限定:各種Mmi1断片(全長、N端末を60,120,180,240アミノ酸欠失、C端末を60,120,180アミノ酸欠失)を発現ベクターに挿入し、mmi1の機能欠損に対する相補能を検定した。Mmi1の全長およびN末端を60アミノ酸欠失した断片はmmi1の生体内での機能を相補できるが、上述のそれ以外の断片は機能相補できないことが明らかになった。2)Mmi1におけるMei2結合領域の決定の試み:in vitro翻訳により^<35>S標識されたMei2およびHA融合Mmi1断片(上記8種)を作製し、混合後抗HA抗体を用いて免疫沈降を行い、オートラジオグラフィーにより検出した。免疫沈降時のバックグラウンドが高く明瞭な結果が得られなかったため、現在条件検討中である。

Eukaryotic growth stops, meiosis begins, and the molecular substrate remains unknown. Mitotic yeast, RNA binding, meiosis initiation and control Mei2 directly interacts with non-coding RNA(meiRNA) during meiosis to form a dot construct at the mei2 locus. Previous studies have shown that Mei2 function is dependent on DSR inhibition during somatic division and meiosis specific mRNA expression, RNA binding is dependent on Mmi1 inactivation. The inactivation of Mei2 and Mmi1 in the nucleus of a single point of isolation, such as the analysis of cell biology. This year, we will review the objectives and determine the functional areas of Mmi1. 1)Inhibition of meiosis specific mRNA expression during somatic cell division requires the identification of functional domains of Mmi1: the expression of various Mmi1 fragments (full-length, N-terminal 60, 120, 180, 240 loss, C-terminal 60, 120, 180 loss) requires the identification of complementary functions for the functional impairment of Mmi1. The length of Mmi1 and the N terminal are 60 degrees. The fragments are complementary to the functions of mmi1 in vivo. The fragments other than the above complement the functions of mmi 1. 2) The test for determining the binding field of Mei2 in Mmi1: Mei2 <35>and HA-fused Mmi1 fragments (the eight types mentioned above) marked with ^ S were prepared in the vitro, and the anti-HA antibodies were mixed and used. Immunosedimentation was performed and detected. When immune sedimentation occurs, the results are high and the current conditions are discussed.