インビトロタンパク質合成系を用いたリポソーム-細胞間ギャップ結合の形成とその応用

利用体外蛋白质合成系统形成脂质体-细胞间隙连接及其应用

• 批准号: 05J52342
• 负责人: 金田 誠
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J52342/
• 关键词: コネキシン; ギャップ結合; リボソーム; in vitroタンパク質発現; ドラッグデリバリーシステム; リポソーム; in vitro発現

リポソームを用いた薬剤導入法の効率の低さや細胞毒性などの問題点を解決するため、インビトロタンパク合成系を用いて、ギャップ結合(GJ)の構成タンパク質であるコネキシン43(Cx43)をリポソーム内で発現させることにより作成したCx43発現リポソームの機能解析、および実用化への応用研究を行っている。このリポソームから培養細胞への物質導入効率を検討するため、リポソームを作成時にカルセインを加え、内部にカルセインを含むCx43発現リポソームを作成し、これをCx43発現細胞に添加した。添加2時間後、リポソームから細胞へのカルセインの移行が認められた。同様に、この系を用いてNF-κBシグナルを阻害するオリゴペプチドを培養細胞に投与したところIL-1β刺激に伴うNF-κBプロモーター活性の上昇、およびCyclooxygenase-2のmRNA発現量の上昇を優位に抑制した。これらの物質移行はCx43を発現していないリポソームやギャップ結合の阻害剤を前処理した場合には認められなかったことから、Cx43発現リポソームの投与によりリポソーム-細胞間に機能的なギャップ結合が形成されることが示唆された。さらに、Cxの別のサブタイプであるCx32を同様に発現させたリポソームで蛍光物質導入実験を行ったところ、Cx32発現培養細胞に対しては物質輸送が認められたのに対し、Cx43発現培養細胞に対してはそのような効果が認められなかった。Cxタンパク質には約20種類のサブタイプが存在し、発現パターンには組織特異性がある。したがって、本研究結果は将来的にvitroやvivoにおける組織・細胞選択的な薬剤導入への可能性を高めるものであり、今後さらに実用化に向け研究を継続する。

リ ポ ソ ー ム を with い た 薬 tonic import method の sharper rate の low さ や cytotoxicity な ど の problem point を す る た め, イ ン ビ ト ロ タ ン パ ク GeChengXi を with い て, ギ ャ ッ プ combination (GJ) の タ ン パ ク qualitative で あ る コ ネ キ シ ン 43 (Cx43) を リ ポ ソ ー ム within で 発 now さ せ る こ と に よ り made し た Cx43 発 now リ ポ Youdaoplaceholder0 ソ ム ム ソ functional analysis, および practical application へ 応 応 application research を field って る る る る. こ の リ ポ ソ ー ム か ら culture cell へ の material import working rate を beg す 検 る た め, リ ポ ソ ー ム を done when に カ ル セ イ ン を え, internal に カ ル セ イ ン を containing む Cx43 発 now リ ポ ソ ー ム を し, consummate こ れ を Cx43 発 cell に now add し た. After adding for 2 hours, the リポソ リポソ ム ム ら ら ら cells へ へ カ セ セ セ セ セ <s:1> <s:1> <s:1> められた められた められた められた <s:1> <s:1> セ セ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> が migrate to が recognize められた. With others in に, こ の is を with い て nf-kappa B シ グ ナ ル を resistance against す る オ リ ゴ ペ プ チ ド を culture cell に cast with し た と こ ろ IL - 1 beta stimulus に with う nf-kappa B プ ロ モ ー タ ー active の rise, お よ び Cyclooxygenase 2 の mRNA 発 now rising volume の を primacy に inhibit し た. こ れ ら の material migration は Cx43 を 発 now し て い な い リ ポ ソ ー ム や ギ ャ ッ プ combining の resistance against tonic を 処 before Richard し た occasions に は recognize め ら れ な か っ た こ と か ら, Cx43 発 now リ ポ ソ ー ム の cast with に よ り リ ポ ソ ー ム - function of intercellular に な ギ ャ ッ プ combined が form さ れ る こ と が in stopping さ れ た. Cx の さ ら に, don't の サ ブ タ イ プ で あ る Cx32 を with others に 発 now さ せ た リ ポ ソ ー ム で 蛍 light material import be 験 を line っ た と こ ろ, Cx32 発 now culture cell に し seaborne て は material conveying が recognize め ら れ た の に し seaborne, Cx43 発 now culture cell に し seaborne て は そ の よ う な unseen fruit が recognize め ら れ な か っ た. About 20 types of <s:1> サブタ プが プが of Cx are present and exhibit パタ, <s:1>, に, に, and tissue-specific がある. し た が っ て, this study は future に vitro や vivo に お け る tissue cells, sentaku な 薬 tonic import へ likely を の め る も の で あ り, future さ ら に be with research を に to け 継 続 す る.

项目成果

"Connexin-integrated Lipososes:Anovel Tool for Drug Delivery into Mammalian Cells"

“连接蛋白整合脂质：一种将药物输送到哺乳动物细胞的新工具”

• 发表时间: 2008
• 作者: H.Nakajima;et. al.;金田 誠
• 通讯作者: 金田 誠

肝ガシにおけるCx43異常発現どビタミンK2の抑制作用

肝橡树Cx43的异常表达及维生素K2的抑制作用

• 发表时间: 2007
• 作者: N.Tawa;et. al.;金田 誠
• 通讯作者: 金田 誠

Vitamin K2 suppresses malignancy of HuH7 hepatoma cells via inhibition of connexin 43

• DOI: 10.1016/j.canlet.2007.12.019
• 发表时间: 2008-05-08
• 期刊: CANCER LETTERS
• 影响因子: 9.7
• 作者: Kaneda, Makoto;Zhang, Dan;Morita, Ikuo
• 通讯作者: Morita, Ikuo

生体におけるギャップ結合の役割とその応用

间隙连接在生物体中的作用及其应用

• 发表时间: 2006
• 期刊: 口腔病学会誌 73
• 作者: 井上真由美;清水泰平;井上 真由美;金田 誠;金田 誠
• 通讯作者: 金田 誠