新規なRNAi抑制活性をもつダイアンソウイルスの移行機構の解明

阐明具有新型 RNAi 抑制活性的马铃薯病毒的迁移机制

• 批准号: 17780035
• 负责人: 海道 真典
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780035/
• 关键词: 植物ウイルス; 細胞間移行; 原形質連絡糸; NAC; 原形質連絡; アグロバクテリウム

申請者は17年度中に、Nicotiana benthamiana植物のNbNACa1遺伝子の発現をサイレンシングによって抑制したGSNAC植物ではRed clover necrotic mosaic virus(RCNMV)の細胞間移行が顕著に抑制され、またRCNMVの移行タンパク質(MP)とGFPとの融合タンパク質(RMP-GFP)の原形質連絡糸(Pd)への局在が遅延することから、NbNACa1遺伝子がRCNMVの細胞間移行に関与する宿主因子遺伝子であるという可能性を見いだした。18年度はこれらの結果を受けて、RCNMVとNbNACa1タンパク質がN.benthamiana細胞中で結合するか否か免疫沈降法によって調べたところ、抗NbNACa1抗体免疫沈降画分からRCNMV MPが特異的に検出できたことから、両タンパク質が結合することがわかった。この結果はNbNACa1タンパク質のRCNMV細胞間移行に及ぼす影響がタンパク質同士の結合を介した直接的なものであることを示唆している。さらにRMP-GFPを発現する組み換えRCNMVをN.benthamianaのプロトプラストに接種して細胞レベルでのRMP-GFPの局在性について調べたところ、感染16時間後には細胞周縁部に小さな不定形の蛍光の固まりが百個以上確認され、接種24時間後くらいまで時間の経過とともに蛍光の固まりが徐々に大きくなり、細胞表面をほとんど埋め尽くすように分布する様子が確認された。またN.benthamiana葉の細胞では感染後期におそらく微少管への分布を表すと思われる繊維状の蛍光が観察された。この結果はTobacco mosaic virusのMPとGFPの融合タンパク質のタバコ細胞における局在パターンとよく似ており、RCNMV MPが小胞体膜上で合成された後、徐々に細胞周縁の小胞体膜上で複製酵素複合体や外被タンパク質とともに巨大な複合体を形成した後にPdに移行するものと考えられる。またPdを含む細胞壁画分を抽出してウェスタン分析したところNbNACa1タンパク質が含まれることがわった。現在、NbNACa1がRCNMV MPのPd局在性にどのように関与するのかを明らかにするべく、NbNACa1と蛍光タンパク質との融合タンパク質の細胞内局在性について調べるとともに、GSNACプロトプラスト内でのRMP-GFP局在について調べている。

In the middle of the 17th year, the applicant suppressed the development of NbNACa1 gene in Nicotiana benthamiana plants, and inhibited the intercellular migration of Red clover necrotic mosaic virus(RCNMV) in GSNAC plants. The protoplast linkage (Pd) between RCNMV migration protein (MP) and GFP fusion protein (RMP-GFP) was also inhibited. NbNaca1 gene is associated with the cell-to-cell migration of RCNMV. In 2018, the results of RCNMV and NbNACa1 antibody binding in N.benthamiana cells were analyzed by immunosedimentation method. The results of anti-NbNACa1 antibody immunosedimentation method were analyzed by RCNMV MP specific immunosedimentation method. The results showed that NbNaca1 could directly affect the cell-to-cell migration of RCNMV. RMP-GFP expression was detected in the group of RCNMV, N.benthamiana and N.benthamiana, and the cells were inoculated with RMP-GFP. The expression of RMP-GFP was detected in the group of RCNMV, N. benthamiana and N. benthamiana. The expression of RMP-GFP was detected in the group of RCNMV, N. benthamiana and N. benthamiana. The expression of RMP-GFP was detected in the group of RCNMV. The cell surface was identified by the distribution of the cells. N.benthamiana leaf cells were observed at the late stage of infection, and the distribution of microtubules was observed at the late stage of infection. The results showed that the fusion of Tobacco mosaic virus MP and GFP in the cytoplasm of human cells was synthesized on the membrane of small cells, and the replication enzyme complex on the membrane of small cells was formed on the membrane of small cells. Pd-containing cell wall extraction and analysis Now, NbNACa1 and RCNMV MP are in the middle of the interaction, NbNACa1 and RCNMV MP are in the middle of the interaction, NbNACa1 and GSNAC are in the middle of the interaction.

项目成果

Expression of an enhancin gene from the Trichoplusia ni granulosis viru confers resistance to lepidopterous insect pests to rice.

粉纹夜蛾颗粒病毒增强素基因的表达赋予水稻对鳞翅目害虫的抗性。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Plant Biotechnology 23
• 作者: Ling E;Shirai K;Kanehatsu R;Kiguchi K.;福島壽斗・白井孝治・木口憲爾;白井孝治・角田嘉伸・福島壽斗・木口憲爾;福島壽斗・白井孝治・木口憲爾;土田 聡・駒崎進吉;Masanori Kaido et al.;Hiroyuki Mizumoto et al.;Mari Mori et al.
• 通讯作者: Mari Mori et al.

Synthesis of infectious in vitro transcripts from Cassia yellow blotch bromovirus cDNA clones and a reassortment analysis with other bromoviruses in protoplasts.

决明黄斑雀斑病毒 cDNA 克隆的感染性体外转录物的合成以及与原生质体中其他雀斑病毒的重配分析。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Arch Virol. 150
• 作者: Iwahashi;F. et al.
• 通讯作者: F. et al.

A plant RNA virus suppresses RNA silencing through viral RNA replication

• DOI: 10.1038/sj.emboj.7600776
• 发表时间: 2005-09-07
• 期刊: EMBO JOURNAL
• 影响因子: 11.4
• 作者: Takeda, A;Tsukuda, M;Okuno, T
• 通讯作者: Okuno, T

Cap-independent translation mechanism of Red clover necrotic mosaic virus RNA2 differs from that of RNA1 and is linked to RNA replication

• DOI: 10.1128/jvi.80.8.3781-3791.2006
• 发表时间: 2006-04-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Mizumoto, H;Iwakawa, HO;Okuno, T
• 通讯作者: Okuno, T

The Red clover necrotic mosaic virus RNA2 trans-activator is also a cis-acting RNA2 replication element

• DOI: 10.1128/jvi.79.2.978-986.2005
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Tatsuta, M;Mizumoto, H;Okuno, T
• 通讯作者: Okuno, T