核酸標識抗体作製技術に基づく迅速・超高感度抗原検出法に関する研究

基于核酸标记抗体生产技术的快速超灵敏抗原检测方法研究

• 批准号: 17790301
• 负责人: 花木 賢一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790301/
• 关键词: PCR; ELISA; 核酸標識抗体; B型肝炎ウイルス

イムノPCR法を安価、迅速、簡便、超高感度、かつ多検体処理可能な抗原検出法にするために検討を行って、以下のことを確立した。1.レポーターDNA(rDNA)は76塩基の合成DNAとし、rDNAを抗原認識抗体に直接化学標識した。2.PCRは最短時間で十分な増幅を実現するために、40分(35サイクル)で完了する条件を決定した。3.PCR産物の検出は、2通りのPCR-ELISA:ビオチン標識プライマーとジゴキシゲニン(dig)標識プライマーまたはdig標識ヌクレオチドによるPUR法を碓立した。PCR-ELISAはストレプトアビジン固相マイクロプレートを用いて常法により行った結果、dig標識ヌクレオチドを用いたPCR法がdig標識プライマーを用いたPCR法よりも検出限界は100倍優れていた。イムノPCR法はB型肝炎ウイルスS抗原(HBsAg)を常法によりPCRチューブへ固相化して検討した。そして、既存法であるELISAプレートによるHBsAgの関節抗体法の検出限界が210pg/mLであったのに対し、dig標識プライマーを用いたイムノPCR法のそれは500fg/mLであった。(420倍の検出限界向上)。また、全工程にかかる時間は約3時間であったことから、概ね所期の目標を達成することができた。dig標識ヌクレオチドを用いたイムノPCR法の検出限界は更に向上すると期待される反面、ランニングコストが大きい欠点がある。そのため、コストを考慮した反応組成の最適化を検討している。

イ ム を Ann 価 ノ PCR method, rapid, simple, high sensitivity, か つ much 検 処 reason might な antigen 検 method に す る た め に 検 line for を っ て, the following の こ と を establish し た. 1. レ ポ ー タ ー DNA (rDNA) は 76 salt の synthetic DNA と し, rDNA を antigen antibody に chemical identification directly know し た. 2. PCR は で very shortest time な raised を picture be presently す る た め に, 40 points (35 サ イ ク ル) finished で す を る conditions decide し た. 3. The PCR products の 検 は, 2 general り の PCR, ELISA: ビ オ チ ン logo プ ラ イ マ ー と ジ ゴ キ シ ゲ ニ ン (dig) logo プ ラ イ マ ー ま た は dig logo ヌ ク レ オ チ ド に よ る PUR method を reef made し た. PCR, ELISA は ス ト レ プ ト ア ビ ジ ン solid-phase マ イ ク ロ プ レ ー ト を with い て method often に よ り line っ た results, dig identification ヌ ク レ オ チ ド を with い た PCR method が dig logo プ ラ イ マ ー を with い た PCR method よ り も 検 out limit は 100 times the optimal れ て い た. イ ム ノ PCR method は hepatitis B ウ イ ル ス S antigen (HBsAg) を often に よ り PCR チ ュ ー ブ へ solid phase change し て beg し 検 た. そ し て, both tabernacle で あ る ELISA プ レ ー ト に よ る HBsAg の masato section method of antibody の 検 out limit が 210 pg/mL で あ っ た の に し seaborne, dig identification プ ラ イ マ ー を with い た イ ム ノ PCR method の そ れ は 500 fg/mL で あ っ た. (420 times 検 検 out of the limit up). ま た, whole project に か か る は about 3 time で あ っ た こ と か ら phase, almost ね の target を reached す る こ と が で き た. Dig logo ヌ ク レ オ チ ド を with い た イ ム ノ PCR method の 検 out limit は more に up す る と expect さ れ る opposite, ラ ン ニ ン グ コ ス ト が big き い points less が あ る. Youdaoplaceholder0 ため and コストを consider the <s:1> た and 応 to form <s:1> optimization を検 to discuss the て and る る る る.