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シクロスポリンを用いたC型肝炎ウイルスゲノム複製機構の解析

利用环孢菌素分析丙型肝炎病毒基因组复制机制

基本信息

批准号：
17790306
负责人：
渡士幸一
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

これまで我々はC型肝炎ウイルス(HCV)ゲノム複製が免疫抑制剤シクロスポリン(CsA)により抑制されることを報告してきた。昨年はCsAを利用したHCVゲノム複製機構の解析により、CsAの標的分子の一つであるシクロフィリン(CyP)Bが効率よいHCVゲノム複製に必須であることを明らかとした。本年度はCyP阻害剤を用いた抗HCV効果についてさらに解析をおこなった。さまざまなHCV株におけるCsA感受性を調べたところ遺伝子型1b株では調べたすべてのものにおいてCsA高感受性であったが、遺伝子型2aの1つの株ではCsAに対する感受性が低かった。また我々はさらにさまざまなHCV株を用いた解析を可能とするため、HCV感染患者血清を用いたin vitro感染系を樹立した。初代ヒト肝細胞にヒトパピローマウイルスE6E7およびhTERT遺伝子を導入することにより、不死化した細胞株を単離した。またこれにinterferon regulatory factor-7のドミナントネガティブ変異体を導入しHCV感染に高許容性となった細胞株を樹立した。この細胞株にHCV感染患者由来血清を処理することにより、細胞内でHCVゲノムが検出され、HCV遺伝子型1b,2a,2bだけではなく4aの検出も初めて可能となった。この細胞を用いた解析によって、CsAによってHCV遺伝子型4a株複製、も抑制されることが判明した。またCyPへの結合活性を高め、さらに免疫抑制活性を欠失したCsA誘導体NIM811の抗HCV効果を調べた。その結果、NIM811はCsAに比べてより低用量で高い抗HCV活性を発揮した。さらにインターフェロンと併用することによりその効果は相加的ないし相乗的に上昇し、3週間処理により細胞内のHCVが検出限界以下にまで完全に排除された。このようにCyP阻害剤は新しい抗HCV剤候補として有用であると期待される。

This is the first time that hepatitis C virus (HCV) has been reported. The CsA target molecule has been identified by the analysis of HCV replication mechanisms in the past year. This year, the CyP inhibitor is used to analyze the anti-HCV effect. CsA susceptibility of HCV strains is regulated by CsA subtype 1b strain, and CsA susceptibility of HCV strains is regulated by CsA subtype 2a strain. The HCV strain was analyzed and the HCV infection system was established. The primary hepatocyte was isolated from the transfected E6E7 and hTERT cells. The introduction of HCV regulatory factor-7 into the host cells and the establishment of highly tolerant HCV cell lines These cell lines are used to detect HCV subtypes 1b,2a, and 2b in cells infected with HCV. The analysis of CsA gene expression in HCV genotype 4a and its inhibition by CsA gene expression in HCV genotype 4a were identified. The binding activity of CyP was high, but the immunosuppressive activity was low, and the anti-HCV effect of CsA inducer NIM811 was modulated. As a result, NIM811 exhibited high anti-HCV activity at lower doses than CsA. In addition, HCV was detected within 3 weeks of treatment and completely excluded. This is a new anti-HCV candidate.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

抗HCV剤候補探索の現状とそれを用いたHCV複製機構の解析

抗HCV候选药物的研究现状及利用其分析HCV复制机制

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
ウイルス 55(1)
影响因子：
0
作者：
Aly HH.et al.;Watashi K. et al.;El-Farrash MA. et al.;Goto K.et al.;Ishii N. et al.;Koyanagi M et al.;Watashi K et al.;渡士幸一ら
通讯作者：
渡士幸一ら

Characterization of the replication sensitivity to cyclosporin A among strains of hepatitis C virus.

丙型肝炎病毒株对环孢菌素 A 复制敏感性的表征。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Journal of Virology 80(9)
影响因子：
0
作者：
Shishioh;N et al.;N Ishii.他
通讯作者：
N Ishii.他

Chemical genetics approach to hepatitis C virus replication: cyclophilin as a target for anti‐hepatitis C virus strategy

DOI：
10.1002/rmv.534
发表时间：
2007-07
期刊：
Reviews in Medical Virology
影响因子：
11.1
作者：
Koichi Watashi;K. Shimotohno
通讯作者：
Koichi Watashi;K. Shimotohno

免疫の進化シクロスポリン20年の軌跡

免疫的进化：环孢素20年

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
Aly HH.et al.;Watashi K. et al.;El-Farrash MA. et al.;Goto K.et al.;Ishii N. et al.;Koyanagi M et al.;Watashi K et al.;渡士幸一ら;渡士幸一ら;Watashi K. et al.;Ishii N et al.;Goto K et al.;シクロスポリン学術国際シンポジウム編
通讯作者：
シクロスポリン学術国際シンポジウム編

Serum-derived hepatitis C virus infectivity in interferon regulatory factor-7-suppressed human primary hepatocytes