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HIV-1機能性RNA発現プロモーター領域の探索

寻找HIV-1功能性RNA表达启动子区域

基本信息

批准号：
17790312
负责人：
松田剛
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

1、NCp7の核小体局在部位を調べた。N末および中央の両塩基性アミノ酸をAla置換した変異体は、著しく核小体局在が減弱した。また、NCp7の二つのZn fingerドメイン内のHisをAla置換した変異体は核小体に残留したままであった。これらの結果から、NCp7は塩基性アミノ酸を介して核小体に局在することが示唆された。2、次にNCp7の核小体局在の原因を調べた。NCp7-EGFPをHeLa細胞内に発現させ、Triton処理後ホルマリン固定を行い、その局在を観察した。その結果、核小体の局在はそのままであった。よってNCp7はタンパク質を介して核小体に局在していないことがわかった。またDNase処理による変化もないことより、RNAを介して核小体に局在することが示唆された。3、GST-NCp7-EGFPのタンパク質精製行ったが、4度保存で沈殿した。保存条件の検討が必要である。4、Biochem J.2006 Sep 15;398(3):475-84.にてウイルスプラスミドを用いた実験で、ウイルス因子が無い状態でも、核小体にプラスミドが取り込まれる結果が報告された。このことはNCp7は核小体にウイルスDNAを運ばない間接的な結果であった。また、NCp7は単独では細胞質局在であるが、EGFPを融合させて核へ入れた場合のみ一時的に核小体に局在する結果が得られた。驚くことに、NCp7-EGFPの塩基性アミノ酸変異体あるいはZinc finger変異体は共に核局在が強まった。この結果はNCp7が核小体を経由して核外移行を行うという新たな機能の発見を示唆している。5、今回の研究で、NCp7を核小体へプラスミドを運ぶツールとしては不適切なため、核小体でのプロモーター解析を行えなかったが、NCp7の新たな機能を発見することができた。この成果は新たなエイズ治療につながる研究になると考えている。

1. NCp7 nucleosome locus is in the middle of the body. At the end of the day, there is a lot of stress in the center of the Ala, and the nucleosome bureau is very weak. Nucleosome, Zn finger, nucleosome, nucleosome. The results show that the nucleosome bureau is very sensitive to the basic information of NCp7. 2. The Nucleosome Bureau of the second "NCp7" is in the "cause" situation. The intracellular symptoms of NCp7-EGFP HeLa were detected. After Triton treatment, the cells were fixed, and the local government was observing the symptoms. The results show that the nucleosome bureau is in trouble. This is the first time that the nucleosome Bureau has been introduced to the NCp7. The DNase, RNA, nucleosome, nucleosome and nucleosome. 3. GST-NCp7-EGFP make sure that you can make sure that you are careful, and save the Shen Dian in 4 degrees. Save the condition that is necessary. 4. Biochem J. 2006 Sep 15: 398 (3): 47584. In this case, you need to use the following information: information, etc. This is due to the results of the NCp7 nucleosome connection between the DNA and the nucleosome. At the same time when the fusion nucleus of both NCp7 and EGFP were integrated into the cell, the results of the nuclear microsomal bureau were satisfactory. The nuclear bureau is in a strong position because of the high levels of acid and acid in the body, the body and the Zinc finger in the body. The results showed that the NCp7 nucleosome was transferred from the nucleus to the outside of the nucleus, and the new machine was able to show that the nucleosome was transferred from the nucleus to the outside. 5. This time, the research, NCp7, nucleosome, nucleosome, nucleos The result of the new study is to improve the quality of research.