Stem cellの脳血液関門通過に関する基礎的研究

研究の目的は、脳血液関門のin vitroモデルを用い、人臍帯血幹細胞migrationの機構を明らかにすることである。まずは正常脳血液関門モデル(C、5% CO_2、75% N_2)とBBB虚血モデル(1% O_2、5% CO_2、94% N_2)の違いについて検討した。培養液はserum freeのものを使用した。その際は20% O_2においても細胞障害性を認めた。1% O_2で細胞障害性がわずかに認められる虚血後3時間を選択した。当初血管内皮細胞は初代培養のものを用いが,培養状態が不安定であった。血管内皮細胞特異的な第8因子も50%のみが染色される状態であった。そのためHUVECを血管内皮モデルとして用いることとした。H^3イヌリンを用いた透過性実験では、虚血モデルにおいて統計学的に優位な透過性の亢進はなかった。同様に20% O_2、1% O_2のもとでoccludin、claudin-1、claudin-5、ZO-1、ZO-2のtight junction proteinsの発現も大きな変化をみとめなかった。本年度はstem cellのmigrationの実験を本格化していく予定である。BBB虚血-再還流モデルも同時に使用することとした。

研究の目的は、脳血液関門のin vitroモデルを用い、人臍帯血幹細胞migrationの機構を明らかにすることである。まずは正常脳血液関門モデル(C、5% CO_2、75% N_2)とBBB虚血モデル(1% O_2、5% CO_2、94% N_2)の違いについて検討した。培養液はserum freeのものを使用した。その際は20% O_2においても細胞障害性を認めた。1% O_2で細胞障害性がわずかに認められる虚血後3時間を選択した。当初血管内皮細胞は初代培養のものを用いが,培養状態が不安定であった。血管内皮細胞特異的な第8因子も50%のみが染色される状態であった。そのためHUVECを血管内皮モデルとして用いることとした。H^3イヌリンを用いた透過性実験では、虚血モデルにおいて統計学的に優位な透過性の亢進はなかった。同様に20% O_2、1% O_2のもとでoccludin、claudin-1、claudin-5、ZO-1、ZO-2のtight junction proteinsの発現も大きな変化をみとめなかった。本年度はstem cellのmigrationの実験を本格化していく予定である。BBB虚血-再還流モデルも同時に使用することとした。