軟骨器質蛋白の転写調節機序の解析

软骨蛋白转录调控机制分析

• 批准号: 17791006
• 负责人: 岡崎 賢
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791006/
• 关键词: 軟骨; 遺伝子発現; 転写因子; 器質; 関節炎; MMP

軟骨細胞においてC/EBP発現増強に反応する遺伝子の検索軟骨細胞株C28I2に転写因子C/EBPを強制発現させ、MMPP1, 3, 13の遺伝子発現を半定量的RT-PCRにて解析したところ、MMP-13の発現増強が認められた。更に定量的real time PCRで解析したところ、やはり発現が増強していた。関節炎の関節軟骨内での発現解析関節リウマチ患者から得られた膝関節軟骨の標本において、免疫染色にてC/EBPとMMP-13はともに同じ領域に発現が認められた。軟骨細胞における転写調節解析軟骨細胞においてC/EBPの強制発現はMMP-13プロモーターの活性を用量依存的に増強させた。また、MMP-13プロモーター上に認められるC/EBPが結合可能な塩基配列をもった領域にC/EBPが実際に結合していることを、ChIPアッセイによって確認した。C/EBP発現アデノウイルスベクターの作成軟骨細胞はプラスミドベクターの導入効率が悪いことが問題である。そのため、より詳細な解析ができるようにアデノウイルスベクターを作成した。

Chondrocyte strain C28I2 was exposed to stress for expression of C/EBP, MMPP1, 3, 13 and MMP-13. Semi-quantitative RT-PCR was used to analyze the expression of MMP-13 and MMP-13. More quantitative real-time PCR analysis was performed and the results were enhanced. The expression of C/EBP and MMP-13 in articular cartilage was detected by immunostaining. Chondrocytes regulate the expression of C/EBP in chondrocytes, and the activity of MMP-13 increases in a dose-dependent manner. C/EBP is a combination of C/EBP and MMP-13. C/EBP is a combination of C/EBP and MMP-13. C/EBP found that the introduction rate of chondrocytes was significantly lower than that of the control group. A detailed analysis of the results of the survey was conducted.

项目成果

A promoter element of the CD-RAP gene is required for repression of gene expression in non-cartilage tissues in vitro and in vivo

• DOI: 10.1002/jcb.20648
• 发表时间: 2006-03-01
• 期刊: JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 4
• 作者: Okazaki, K;Yu, H;Sandell, LJ
• 通讯作者: Sandell, LJ