転写因子CITED-4及びRev-Erbαを介する卵巣顆粒膜細胞の増殖機構の解明

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本研究ではDES投与によりラット卵巣で発現誘導される遺伝子群をDNAマイクロアレイによる網羅的解析で明らかにし、それらの卵巣顆粒膜細胞の増殖に対する機能の解明を目的として研究を行った。18年度は転写因子HIF-2αおよび血管内皮細胞増殖因子VEGFの機能について研究を行った。DNAマイクロアレイの結果より、HIF-2αはDES処理により卵巣で早期に強く発現誘導された。HIF-2α欠損マウスは不妊であることが報告されていることから、HIF-2αの卵巣における機能について、さらにHIF-2αの標的遺伝子として報告のあるVEGFについて解析した。HIF-2αのDES処理後の卵巣における発現をReal-time PCRにより検討したところ、早期に強い発現誘導が認められ、その後96時間まで持続した。しかしVEGFはDES処理による顕著な発現変化は認められなかった。またHIF-2αと類似の機能を持つHIF-1αについても発現変化は見られなかった。そこで下垂体切除ラットを用いて、ゴナドトロピン非存在下におけるDESの卵巣へ直接的な作用をin situ hybridizationにより検討したところ、HIF-2αはDES処理前には発現がほとんど認められないが、その後DES処理により早期に卵巣顆粒膜細胞において発現が認められ、その後96時間まで卵巣顆粒膜細胞における強い発現が持続した。VEGFについても同様に検討したところ、DES処理前には間質および莢膜細胞で弱く発現しているが、DES処理により2時間で莢膜細胞における発現が上昇しその後低下した。このことから、DES処理による卵巣機能の変化においてHIF-2αは卵巣顆粒膜細胞の増殖において重要な機能をもつことが考えられ、またDES処理でのVEGFの発現を直接調節していない可能性が示唆された。一方VEGFはゴナドトロピン作用を持つPMSG処理をした幼若ラットの卵巣で排卵前の卵巣顆粒膜細胞において強い発現誘導が認められたこと、またVEGF受容体の阻害剤を用いた解析により卵胞発育過程で閉鎖する卵胞が多く認められたことからVEGFが卵巣顆粒膜細胞の分化および卵胞発育への関与が示唆された。