神経幹細胞の分化誘導に関与するタンパク質因子の同定とその解析

点击翻译按钮获取中文摘要

昨年度までの研究により、培養神経幹細胞にPACAPを添加するとアストロサイトへ分化すること、さらにPACAPの下流においてPKC betaが非常に重要な役割を担っていることが明らかとなった。さらにin vivoにおいてもPACAPが神経幹細胞を幼弱なグリア細胞であるラジアルグリアに分化誘導することが明らかとなった。そこで本年度はHPLCを用いてタンパク質を分子量と等電点で分離し、質量分析機で同定することによってPACAPによって誘導される分化因子を明らかとすることを目的に実験を行った。8月までの実験により培養神経幹細胞にPACAPを添加後3,6,12時間後及び1,2,4,6日後に発現するタンパク質のサンプルを調製することができた。またそのコントロールとなるサンプルの調製も行った。9月以降に共同研究先の米国Tulane大学のDr.Prockopのラボにて二次元HPLCを用いて分離、発現変動のあるものを抽出し、質量分析器を用いて同定する予定である。また、RT-PCR法やin situハイブリダイゼーション法を用いて神経幹細胞にその発現を確認することを予定している。研究代表者がTexas A&M Universityにポストドクターとして就職が決まったため本研究計画は中途廃止となるが、就職先でのタンパク質の同定、解析が成功すれば神経幹細胞のアストロサイトへの分化誘導機構の解明に大きく寄与できると考えられる。