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神経幹細胞の分化誘導に関与するタンパク質因子の同定とその解析

神经干细胞诱导分化相关蛋白因子的鉴定与分析

基本信息

批准号：
06J00487
负责人：
渡邊潤
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J00487/
关键词：
神経幹細胞アストロサイト分化 PACAP ラジアルグリア神経発生

项目摘要

昨年度までの研究により、培養神経幹細胞にPACAPを添加するとアストロサイトへ分化すること、さらにPACAPの下流においてPKC betaが非常に重要な役割を担っていることが明らかとなった。さらにin vivoにおいてもPACAPが神経幹細胞を幼弱なグリア細胞であるラジアルグリアに分化誘導することが明らかとなった。そこで本年度はHPLCを用いてタンパク質を分子量と等電点で分離し、質量分析機で同定することによってPACAPによって誘導される分化因子を明らかとすることを目的に実験を行った。8月までの実験により培養神経幹細胞にPACAPを添加後3,6,12時間後及び1,2,4,6日後に発現するタンパク質のサンプルを調製することができた。またそのコントロールとなるサンプルの調製も行った。9月以降に共同研究先の米国Tulane大学のDr.Prockopのラボにて二次元HPLCを用いて分離、発現変動のあるものを抽出し、質量分析器を用いて同定する予定である。また、RT-PCR法やin situハイブリダイゼーション法を用いて神経幹細胞にその発現を確認することを予定している。研究代表者がTexas A&M Universityにポストドクターとして就職が決まったため本研究計画は中途廃止となるが、就職先でのタンパク質の同定、解析が成功すれば神経幹細胞のアストロサイトへの分化誘導機構の解明に大きく寄与できると考えられる。

In the past year, PACAP was added to the culture of human stem cells, and PKC beta was very important in the downstream of PACAP. In vivo, PACAP induces differentiation of neural stem cells. This year's HPLC was used to determine the molecular weight and isoelectric point of PACAP. In August, it was possible to prepare the basic support cells 3, 6, and 12 days after PACAP was added and 1, 2, 4, and 6 days after PACAP was added to the cultured neural stem cells. The control unit is a separate unit. In September, Dr. Prockop of Tulane University, USA, conducted a joint study on the use of secondary HPLC for separation, detection, extraction, and mass spectrometry. The development of human stem cells was confirmed by RT-PCR and in situ hybridization. The representative of the study was Texas A&M University. The study was conducted halfway through the project. The quality of the study was identified and analyzed successfully. The mechanism of differentiation induction of neural stem cells was clarified.