乳歯歯髓細胞が神経幹細胞の増殖・分化に与える影響について

乳牙牙细胞对神经干细胞增殖和分化的影响

基本信息

批准号：
18659611
负责人：
三留雅人
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokushima (2007)Hokkaido University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

最初に培養系において神経幹細胞の分化における歯髄細胞の影響を調べるために、EGF反応性神経幹細胞を培養した。神経幹細胞培養液からEGFを除去すると神経幹細胞は培養ディッシュの底面に接着し分化を始める。歯髄細胞が産生する栄養因子が神経幹細胞の分化に与える影響を調べるために、歯髄細胞を培養した培養液を加え、分化動態への影響を検討した。歯髄細胞培養液を加えた群では、神経幹細胞は速やかに分化を開始した。分化後、神経幹細胞がどのような神経細胞に分化したかを調べるために、ニューロンのマーカーであるβ-チューブリンおよびアストロサイトのマーカーであるGFAPの抗体で免疫染色をすると、歯髄細胞培養液を加えた群では、有意にニューロンに分化する割合が増加した。次に神経幹細胞と歯髄細胞を共培養すると、歯髄細胞の増殖速度が有意に上昇し、二種類の細胞が相互に混じり有りながら細胞間ネットワークを形成することが、観察された。以上の結果から神経幹細胞と歯髄細胞は相互に影響しながら新しいネットワークを形成し、分化能や増殖能などの性質の変化に影響を与えている可能性が示唆された。現在、GFPマウス由来歯髄細胞をマウスの脳内に移植すると側脳室周辺で歯髄細胞が生存することが確認されている。今回、マウス歯髄を脳内神経幹細胞が存在している延髄孤束核に移植し、脳内での歯髄細胞の生着を確認しており、生着後どのようなネットワークを構成し、神経幹細胞へどのように影響するか調べている。

首先，培养EGF反应性神经干细胞，以研究浆细胞对培养系统中神经干细胞分化的影响。当EGF从神经干细胞培养中取出时，神经干细胞会粘在培养皿的底部并开始分化。为了研究牙髓细胞产生的营养因子对神经干细胞分化的影响，添加了培养的浆细胞，并检查了对分化动力学的影响。在添加纸浆细胞培养基的组中，神经干细胞开始迅速区分。分化后，当使用β-微管蛋白的抗体进行免疫染色，神经元标记物和星形胶质细胞标记的GFAP（添加纸浆细胞培养基的分化的比例）显着增加。接下来，当将神经干细胞和浆细胞共培养时，纸浆细胞的生长速率显着增加，并且观察到将两种类型的细胞混合在一起形成细胞细胞网络。以上结果表明，神经干细胞和浆细胞可能会形成新的网络，同时彼此影响，从而影响分化和增殖潜力等性质的变化。目前，已经证实，当将GFP小鼠衍生的牙髓细胞植入小鼠大脑中时，浆细胞在侧心室周围存活。在本文中，将小鼠果肉移植到髓质基因座核中，其中大脑中的神经干细胞所在，并确认了牙髓细胞的植入，并研究了浆细胞的植入，并如何影响神经干细胞。