バイオアクチュエータ作製を目指したタンパク質モータプレスチンの精製とその機能解明

蛋白质运动 prestin 的纯化及其对生物致动器生产的功能的阐明

• 批准号: 06J05085
• 负责人: 飯田 浩司
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J05085/
• 关键词: タンパク質モータ; Prestin; 可溶化; 精製; 等温滴定熱量測定; 分子間相互作用

哺乳類内耳に存在する外有毛細胞の細胞長変化は,聴覚の鋭敏性を実現している内耳増幅機構の中心的役割を担っている.この細胞長変化の源がタンパク質モータprestinの構造変化である.2000年の遺伝子の同定以来,prestinに関する知見は徐々に蓄積されつつあるが,prestinの構造変化のメカニズムは未だ不明である.そのメカニズムを明らかにするには,これまで行われてきている細胞レベルでの解析に加えて,精製したprestinを用いた分子レベルでの解析が必要である.しかし,prestinを精製した報告はない.そこで本研究では,これまでに構築したFLAGタグ融合prestinを安定発現する培養細胞株よりprestinを精製し,得られたprestinの機能の有無の評価を試みた.まず,12種類の界面活性剤によるprestinの可溶化率を検討し,η-nonyl-β-D-thiomaltopyranosideがprestinの可溶化剤として最適であることを明らかにした.次にFLAGタグを用いたアフィニテイークロマトグラフィーにより可溶化したprestinの精製に成功した.最後に得られた精製prestinの機能の有無を,prestinの構造変化に必要であることが知られている塩化物イオンとの相互作用を等温滴定型熱量計で解析し評価した.その結果,精製prestinは塩化物イオンと相互作用する機能を有していることが示された.またその相互作用が吸熱反応であることが明らかになった.

The existence of the inner ear of mammals means that there are hair cells on the outside and the cells have grown and changed, and the sensitivity of the inner ear has changed and the inner ear has grown. The center of the width mechanism is cut and dried. The source of cell growth is the presti nのstructural changeである.Since 2000の伝子の同定, prestinに关する知见は Xu 々に综合されつつあるが,prestinのstructural changeのメカニズムは无だUnknownである.そno analysis of the cellsえて,Refined したprestinをUse いたmolecule レベルでのanalytic がnecessary である.しかし,pr estinをrefined reportはない.そこでthis researchでは,これまでにconstructedしたFLAGタグFusion of prestin's stable and stable cultured cell lines and prestin's refined cells, resulting in られたpのfunctionality of restin, evaluation of the presence or absence of restin, test of 12 kinds of interface activity, solubility rate of prestin, eta-nonyl-β-D-thiomaltopyran oside がprestinのsoluble 剤としてoptimal であることを明らかにした.时にFL AGタグを用いたアフィニテイークロマトグラフィーによりsolubleしたprestinのRefining is successful. Finally, refining prestin is successful. Prestin is functional. Isothermal titration type calorimeter that requires structural changeでanalytical evaluation 価した.その result, refined prestin chemical compound イオンとinteraction するfunctional をThere is a していることが出された.またそのinteractionがendothermic reactionであることが明らかになった.

项目成果

Effects of heat stress on Young's modulus of outer hair cells in mice

• DOI: 10.1016/j.brainres.2006.05.095
• 发表时间: 2006-08
• 期刊: Brain Research
• 影响因子: 2.9
• 作者: M. Murakoshi;N. Yoshida;Y. Kitsunai;Koji Iida;S. Kumano;Takashi Suzuki;Toshimitsu Kobayashi;H. Wada

Local mechanical properties of mouse outer hair cells : atomic force microscopic study.

小鼠外毛细胞的局部机械特性：原子力显微镜研究。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Auris Nasus Larynx 33(2)
• 作者: Murakoshi;M. et al.
• 通讯作者: M. et al.

Imaging by atomic force microscopy of the plasma membrane of prestin-transfected Chinese hamster ovary cells

• DOI: 10.1007/s10162-006-0041-z
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: JARO-JOURNAL OF THE ASSOCIATION FOR RESEARCH IN OTOLARYNGOLOGY
• 影响因子: 2.4
• 作者: Murakoshi, Michio;Gomi, Takashi;Wada, Hiroshi
• 通讯作者: Wada, Hiroshi

Analysis of the Dynamic Behavior of the Inner Hair Cell Stereocilia by the Finite Element Method

• DOI: 10.1299/jsmec.49.828
• 发表时间: 2006-09
• 期刊: Jsme International Journal Series C-mechanical Systems Machine Elements and Manufacturing
• 作者: T. Matsui;C. Nakajima;Yui Yamamoto;M. Andoh;Koji Iida;M. Murakoshi;S. Kumano;H. Wada