転写リズムを生成する核内機能複合体の同定と生体リズム調整剤の開発

鉴定产生转录节律的核功能复合物和生物节律调节剂的开发

• 批准号: 18779004
• 负责人: 土居 雅夫
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kyoto University (2007)Kobe University (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18779004/
• 关键词: 生体リズム; 遺伝子転写; PERIOD2; 視交叉上核; PER10D2; 視交叉上枝; GPCR

交付申請書に記載した研究目的・研究実施計画に沿って研究を行い、下記の成果を得た。生体リズムの形成維持を担う時計センターは、脳内視床下部に存在する視交叉上核(SCN)にある。SCNに発現する遺伝子群を網羅的に捕らえるため、高純度のSCN抽出RNA溶液を用いてDNAマイクロアレイ解析を行った。ここで得られた候補分子群の発現を確定する目的で、SCN組織切片を用いてさらにin situ hybridizationを行った。また、転写リズムの生成に関わる核内機能複合体の同定を目指し、時計発振ループの中枢因子PER2に結合する蛋白質(PER-binding protein,ここではPAPと呼ぶ)を検索した。PER2-PAP複合体を精製するため、Flagタグ付きのPER2蛋白質を発現する細胞株を作出した。PER2蛋白質が転写抑制因子として機能する特定の時間帯(血清刺激後8-14時間後)を狙って細胞を回収し、核抽出液に含まれるmPER2蛋白質複合体を抗Flag抗体カラムを用いてアフィニティー精製した。この複合体をグリセロールグラジエント法を用いてサイズ分画した後、アクリルアミドゲルに展開した。銀染色によって検出したタンパク質を質量分析解析に供し、PAPの候補となる新規分子を同定することに成功した。この分子の特性を知るため、組み換え蛋白質を調製し、これを抗原として使用することによりPAPを特異的に認識するための抗体を得た。

Submit the application form に record the た research purpose · research implementation plan に along the って research を line に, and record the を results を obtain た. Born body リ ズ ム の form maintain を bear う chronometer セ ン タ ー は, 脳 sees the bed bottom に existence す る suprachiasmatic nucleus (SCN) に あ る. SCN に 発 now す る but 伝 subgroup を snare に catching ら え る た め, high purity の SCN out RNA solution を い て DNA マ イ ク ロ ア レ イ parsing line を っ た. こ こ で have ら れ た candidate molecules of の 発 を now determine す る purpose で, SCN biopsy を い て さ ら に the in situ hybridization を line っ た. ま た, planning to write リ ズ ム の generated に masato わ る function within the nuclear complex の with fixed を refers し vibration, when 発 ル ー プ の central factor PER2 に combining す る protein (PER - binding protein, こ こ で は PAP と shout ぶ) を 検 cable し た. The per2-pap complex is を refined するため, and Flagタグ is used to make <s:1> PER2 protein を in する cell lines を to produce た た. PER2 protein が planning write inhibitory factor と し て function す 帯 る の specific time (8 to 14 after serum stimulus time) after を previously っ て cells を back 収 し, nuclear extract contains に ま れ る mPER2 protein complex を Flag antibody resistance カ ラ ム を with い て ア フ ィ ニ テ ィ ー refined し た. こ の complex を グ リ セ ロ ー ル グ ラ ジ エ ン を ト method with い て サ イ ズ points draw し た, ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル に expand し た. Silver staining に よ っ て 検 out し た タ ン パ ク qualitative analytical に を quality analysis for し, PAP の alternate と な る molecular を new rules might be す る こ と に successful し た. こ の characteristics を の molecules known る た め, group み in え protein を し modulation, こ れ を antigen と し て use す る こ と に よ り PAP を specific に know す る た め の antibody を た.

项目成果

Signaling mediated by the dopamine D2 receptor potentiates circadian regulation by CLOCK:BMAL1.

• DOI: 10.1073/pnas.0510691103
• 发表时间: 2006-04
• 期刊: Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America
• 影响因子: 11.1
• 作者: I. Yujnovsky;J. Hirayama;M. Doi;E. Borrelli;P. Sassone-Corsi

時計遺伝子の転写機構

时钟基因转录机制

• 发表时间: 2006
• 期刊: 医学のあゆみ 216
• 作者: Andoh;S.Y.;Umezaki;M.;Nakamura;K.;Kizuki;M.;Takano;T.;梅崎昌裕(共著);Ishigaki et al.;Irene Yujnovsky;土居 雅夫
• 通讯作者: 土居 雅夫