HCV持続感染に関わる肝内免疫環境の解析と肝細胞由来HSPを用いた寛容破綻の誘導

利用肝细胞源性 HSP 分析与持续性 HCV 感染相关的肝内免疫环境并诱导耐受破坏

• 批准号: 18790477
• 负责人: 佐藤 憲一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790477/
• 关键词: HCV; HSP; gp26; 20Sプロテアソーム; NK細胞; γδT細胞

§HCV発現肝細胞由来HSP gp96・20Sプロテアソームの精製とDCパルスの基礎的検討CN2マウスのHCV蛋白発現肝細胞、非発現肝細胞を分離、ホモジナイズし超遠心後の上清をCon-Aセファロースカラムに通し結合分画を得た分画を、MonoQカラムを用いNaCl勾配によるFPLCにより分画して、ERに存在するHSPのgp96に対するモノクローナル抗体を用いたSDS-PAGEによりgp96含有分画を得た。ついで、MHC分子により提示される抗原ペプチドを切り出す能力が高く、実質細胞による内在性抗原の提示に深く関わる免疫プロテアソーム構成ユニット20Sプロテアソームを精製した。骨髄細胞からMACSを用いDC前駆細胞を分離し、rGM-CSF、rIL-4を添加し24時間培養後にモノクローナル抗体を用いgp96受容体CD91陽性分画をポジテイブセレクションして得たDCにHCV蛋白発現肝細胞から分離したgp96または20Sプロテアソームをパルスし、さらにrGM-CSF、rIL-4を添加し24時間培養してDCを成熟させ抗原提示能を増強させた。こうして得られたgp96または20SプロテアソームをパルスしたDCとナイーブT細胞を混合培養し、HCV蛋白発現肝細胞を標的細胞、刺激を受けたT細胞を標的細胞に用いたCTLアッセイを行い、HCV発現肝細胞由来gp96・20SプロテアソームのHCV特異的免疫誘導能を検討したところ、T細胞の増殖はわずかに認められるものの、コントロールと比べて有意差を認めなかった。また、T細胞のThl、Th2サイトカイン産生動態も有意差を認めなかった。

§HCV developing hepatocytes origin HSP gp96·20S protein purification and DC development basic research CN2 HCV protein developing hepatocytes, non-developing hepatocytes isolation, purification, purification, The presence of HSP96 in the serum was detected by SDS-PAGE. MHC molecules are highly sensitive to antigen selection and expression, and cells are sensitive to intrinsic antigen selection and expression. DC cells were isolated from MACS cells, rGM-CSF and rIL-4 were added to the culture medium for 24 hours, and CD91 positive staining of HCV protein was detected from DC cells isolated from MACS cells. rGM-CSF and rIL-4 were added to the culture medium for 24 hours. HCV protein is produced by T cell co-culture, HCV protein is produced by T cell target cells, HCV protein is produced by T cell co-culture, HCV protein is produced by T cell co-culture, HCV I'm not sure if I'm going to be able to do that. Thl, Th2 cells generate a dynamic response.