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遺伝子改変を行ったマウス胚性幹細胞からの効率的な内耳有毛細胞の分化誘導方法の開発

开发一种有效方法诱导转基因小鼠胚胎干细胞分化为内耳毛细胞

基本信息

批准号：
18791219
负责人：
松吉秀武
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791219/
关键词：
ES細胞有毛細胞遺伝子改変内耳

项目摘要

哺乳類の内耳有毛細胞は、一度障害されると再生しない。また有毛細胞障害に対する治療方法は現在のところ確立されていない。失われた有毛細胞の機能を再生させるため、ES細胞を有毛細胞に分化させた細胞を内耳へ移植することによって、内耳障害を治療しようとする研究を開始した。有毛細胞への分化誘導効率の向上、生体内へ移植した場合の長期的な分化能力の維持、および移植された細胞の生着率を高める必要性がある。本研究では、この問題を解決するために発生初期の内耳に発現しており、有毛細胞への分化に関わる遺伝子(Math1)と神経成長に関わる遺伝子(NGF:nerve growth factor)をマウスES細胞に導入し、この遺伝子改変マウスES細胞を有毛細胞へと分化誘導させることを試みる。導入したこれら2種類の遺伝子によって、効率的にマウスES細胞を有毛細胞に分化誘導させることが可能であるか否かを検証することを目的とした。本年度はMath1遺伝子を組み込んだ発現ベクターを作成するためにマウスの蝸牛よりmRNAを採取した。これを鋳型としcDNAを作成した。マウスMath1に特異的なプライマーを外注した。このプライマーとマウス蝸牛由来cDNAから得られたPCR産物をpGEM-T easy vectorとligationした。DNA sequencerにてMath1の塩基配列を確認塩基配列の正常なMath1が得られたらこれを確認した。マウスES細胞にて高発現させることが可能であるpCAGGS-IRES-PuroR vectorにligatioした。このpCAGGS-Math1-IRES-PuroRvectorをマウスES細胞に遺伝導入を試みたが、うまく導入ができなかった。現在導入可能な条件を調べている途中である。

Mammals have hair cells in the inner ear that are damaged for a while and then regenerate. The treatment of hairy cell injury is now well established. The study of hair cell regeneration and hair cell differentiation in the inner ear It is necessary to increase the differentiation induction rate of hairy cells, maintain the long-term differentiation ability in vivo and transplant cells, and increase the survival rate of hairy cells. This study aims to solve the problem of early inner ear development, hairy cell differentiation, and induction of NGF (nerve growth factor) in ES cells. 2 kinds of genes are introduced into the cells, and the differentiation rate of ES cells is increased. This year, Math1 gene expression was detected. A new type of cDNA was created. Math. 1. The PCR product was obtained from the cDNA of the snail. DNA sequencing confirmed that Math1 was aligned correctly. ES cells are highly developed, and the pCAGGS-IRES-PuroR vector is ligated. This pCAGGS-Math1-IRES-PuroR vector is introduced into ES cells. Now import the conditions to adjust the way.