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組織培養を利用した味覚修飾物質ミラクリンの大量生産に関する研究

组织培养大规模生产调味剂奇迹菌素的研究

基本信息

批准号：
07F07184
负责人：
江面浩
金额：
$ 1.41万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07184/
关键词：
ミラクリン組換え植物レタストマト大量生産

项目摘要

本研究では、甘味修飾タンパク質であるミラクリンを発現する組換え植物をバイオリアクター等を使って大量培養し、ミラクリンを安定生産するための基礎技術開発を行った。このために、1)Agroinfiltration法による組換えミラクリン生産の可能性を検討した。2)現有のミラクリン遺伝子導入レタスでは、ミラクリン遺伝子を構成的なプロモーターで駆動しているために、遺伝子不活化が起こった可能性がある。そこで、本研究では葉特異的なプロモーターでミラクリン遺伝子を駆動して、この問題が解決出来ないかどうかについて検討した。3)ミラクリン遺伝子導入トマトでは3世代を経過した現在においても安定してミラクリンを発現している。この組換えトマトを使ってバイオリアクターを使ったミラクリン生産についての研究を行った。その結果、1)については、十分量のミラクリンがレタスで生産出来なかった。2)については、レタスのユビキチンプロモーター及びターミネーターを使ったミラクリン発現形質転換レタスを作成した。作成した組換え体の導入遺伝子の遺伝子安定性を解析した結果、ミラクリンmRNA及びミラクリンタンパク質とも後代において高いレベルで安定発現していた。これにより、従来の35Sプロモーターを用いた際に見られた遺伝子不活化の問題が解決された。3)については、組換えトマトからのカルス誘導条件の検討を行い、バイオリアクターに移植できそうなフライアブルカルスの選抜を行ったが、増殖速度の速い細胞系の選抜が出来なかった。以上、本研究により、組換えレタスでミラクリンを遺伝的に安定して発現する技術開発に成功した。

This study is aimed at developing basic technologies for mass cultivation and stable production of plant components. 1) The possibility of agrofiltration is discussed. 2)There is a possibility that the existing gene transfer mechanism may not be activated due to the fact that the gene transfer mechanism is not activated. This study is aimed at solving the problem of leaf specificity. 3) The introduction of a new gene into a new generation has led to the emergence of a new gene. This is the first time that we've had a chance to make a difference. The result is: 1) The amount of the product is very small. 2) To make the quality change of the appearance of the material in the process of production and production. The results of gene stability analysis of introduced genes in the composition of the gene were as follows: 1. The problem of inactivation of the 35S in the middle of the application is solved. 3) During the discussion of the induction conditions for the replacement of In this study, the stability and development of technology were successfully achieved.