肝臓における炭水化物応答性遺伝子の転写制御機構の解析
肝脏碳水化合物反应基因转录调控机制分析
基本信息
- 批准号:07J00768
- 负责人:
- 金额:$ 0.64万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2007
- 资助国家:日本
- 起止时间:2007 至 2008
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究では、肝臓における炭水化物応答性遺伝子であるL型ピルビン酸キナーゼ(LPK)遺伝子の転写調節機構を明らかにするために、転写関連因子の相互作用の点から解析を行い、以下の結果を得た。1.LPK遺伝子の炭水化物応答性転写因子であるChREBPが転写共役因子のPGC-1αとin vitroで結合することを見出していたが、GST pulldown assayによりこの結合がChREBPの7-150および659-760領域とPGC-1αの650-797領域の間で起こることを示した。PGC-1αのこの結合はChREBPのLPK遺伝子プロモーターへの結合を阻害し、ChREBPによるLPK遺伝子の転写活性化を抑制した。さらに、この結合は共免疫沈降法により両因子を強制的に発現させた培養細胞中でも起こることを示した。しかし、肝細胞での内因性両因子の間にも同様の結合がみられるかどうかはまだ明らかでない2.肝細胞で発現している転写因子のHexもin vitroでChREBPと結合することが示されたが、強制発現させた培養細胞では認められなかったし、レポーターアッセイでも有意な影響は認められなかった。3.ChREBPの新規結合タンパク質のスクリーニングを2つの方法により行った。1つはGST-ChREBPを作製し、これに結合する特異的なタンパク質を肝臓核抽出物から検索した。もう1つは酵母ツーハイブリドシステムを利用して、肝臓mRNAから検索した。しかしながら、これまでのところ有力な候補となりうるタンパク質の同定には成功していない。
In this study, we analyzed the interaction between the LPK gene and the LPK gene, and obtained the following results. 1. ChREBP and PGC-1α in vitro were found to be the binding factors of LPK and GST pulldown assay, respectively, in the 7-150 domain of ChREBP and the 650- 760 domain of PGC-1α. The binding of PGC-1α inhibits the binding of ChREBP to LPK protein and inhibits the activation of ChREBP to LPK protein. In addition, the combination of immune sedimentation method and factor stress in cultured cells showed that 2. Hepatocyte production and expression of endogenous factors in vitro ChREBP binding and expression of endogenous factors in cultured cells. 3. ChREBP's new regulations combine the two methods of quality control. 1. GST-ChREBP is controlled and combined with specific substances to detect liver nuclear extracts. The first step is to use the gene to detect the gene. A strong candidate for the job. A strong candidate for the job.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
PGC-1α represses ChREBP-activated L-type pyruvate kinase gene transcription
PGC-1α 抑制 ChREBP 激活的 L 型丙酮酸激酶基因转录
- DOI:
- 发表时间:2007
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Yamamoto;T.;et. al.;佐藤 伸一
- 通讯作者:佐藤 伸一
Identification of cis-regulatory elements and trans-acting proteins of the rat carbohydrate response element binding protein gene
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- DOI:
- 发表时间:2007
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Hiroki Shimizu;et. al.;Shin-ichi Satoh
- 通讯作者:Shin-ichi Satoh
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