肝臓における炭水化物応答性遺伝子の転写制御機構の解析

肝脏碳水化合物反应基因转录调控机制分析

• 批准号: 07J00768
• 负责人: 佐藤 伸一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J00768/
• 关键词: 炭水化物応答性遺伝子; L型ピルビン酸キナーゼ; 転写因子; ChREBP; PGC-1α; 転写調節

本研究では、肝臓における炭水化物応答性遺伝子であるL型ピルビン酸キナーゼ(LPK)遺伝子の転写調節機構を明らかにするために、転写関連因子の相互作用の点から解析を行い、以下の結果を得た。1.LPK遺伝子の炭水化物応答性転写因子であるChREBPが転写共役因子のPGC-1αとin vitroで結合することを見出していたが、GST pulldown assayによりこの結合がChREBPの7-150および659-760領域とPGC-1αの650-797領域の間で起こることを示した。PGC-1αのこの結合はChREBPのLPK遺伝子プロモーターへの結合を阻害し、ChREBPによるLPK遺伝子の転写活性化を抑制した。さらに、この結合は共免疫沈降法により両因子を強制的に発現させた培養細胞中でも起こることを示した。しかし、肝細胞での内因性両因子の間にも同様の結合がみられるかどうかはまだ明らかでない2.肝細胞で発現している転写因子のHexもin vitroでChREBPと結合することが示されたが、強制発現させた培養細胞では認められなかったし、レポーターアッセイでも有意な影響は認められなかった。3.ChREBPの新規結合タンパク質のスクリーニングを2つの方法により行った。1つはGST-ChREBPを作製し、これに結合する特異的なタンパク質を肝臓核抽出物から検索した。もう1つは酵母ツーハイブリドシステムを利用して、肝臓mRNAから検索した。しかしながら、これまでのところ有力な候補となりうるタンパク質の同定には成功していない。

This study で は routine, liver に お け る carbon hydrates 応 traces of a sexual 伝 son で あ る L ピ ル ビ ン acid キ ナ ー ゼ (LPK) posthumous son 伝 の planning write regulator を Ming ら か に す る た め に, planning to write masato even factor の の interaction point か ら parsing を い, the result of the following の を た. 1. Traces of LPK 伝 son の carbon hydrates 応 planning to write a sex factor で あ る ChREBP が planning to write a total service factor の pgc-1 alpha alpha と in vitro で combining す る こ と を shows し て い た が, GST pulldown Assay に よ り こ の combining が ChREBP の 7-150 お よ び 659-760 field と pgc-1 alpha alpha の で up between 650-797 field の こ る こ と を shown し た. Pgc-1 alpha alpha の こ の combining は ChREBP の LPK posthumous son 伝 プ ロ モ ー タ ー へ の combining を resistance against し, ChREBP に よ る LPK posthumous son 伝 の planning write activeness を inhibit し た. さ ら に, こ の は were immune to sink method に よ り struck factor を mandatory に 発 now さ せ た culture cell in で も up こ る こ と を shown し た. {" ids ":" text ":" 1, "text" : "1," text ":" 1, 1, 2, 1, 2, 2, 1, 2, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 2. "} Liver cells で 発 now し て い る planning write factor の Hex も in vitro で ChREBP と combining す る こ と が shown さ れ た が, forced 発 now さ せ た culture cell で は recognize め ら れ な か っ た し, レ ポ ー タ ー ア ッ セ イ で も intentionally な influence は recognize め ら れ な か っ た. 3. The ChREBP <s:1> new regulations are implemented in combination with the タ パ パ パ <s:1> quality <s:1> ス <e:1> リ <s:1> ニ ニ グを グを2 <s:1> method によ った. 1 <s:1> <s:1> GST-ChREBPを is used to prepare <s:1> and <s:1> れに in combination with する specific なタ <s:1> パ を を を を を liver nuclear extract を ら検 ら検 and た た. Youdaoplaceholder0 う1 う ブリドシステムを yeast う ハ ハ ブリドシステムを ブリドシステムを utilizes <s:1> て, liver mRNA ら検 ら検 to extract <s:1> た. し か し な が ら, こ れ ま で の と こ ろ powerful な alternate と な り う る タ ン パ ク qualitative の with fixed に は successful し て い な い.

项目成果

PGC-1α represses ChREBP-activated L-type pyruvate kinase gene transcription

PGC-1α 抑制 ChREBP 激活的 L 型丙酮酸激酶基因转录

• 发表时间: 2007
• 作者: Yamamoto;T.;et. al.;佐藤 伸一
• 通讯作者: 佐藤 伸一

Identification of cis-regulatory elements and trans-acting proteins of the rat carbohydrate response element binding protein gene

大鼠碳水化合物反应元件结合蛋白基因的顺式调节元件和反式作用蛋白的鉴定

• 发表时间: 2007
• 期刊: Archives of Biochemistry and Biophysics 461
• 作者: Hiroki Shimizu;et. al.;Shin-ichi Satoh
• 通讯作者: Shin-ichi Satoh