肝臓における炭水化物応答性遺伝子の転写制御機構の解析

肝脏碳水化合物反应基因转录调控机制分析

• 批准号: 07J00768
• 负责人: 佐藤 伸一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J00768/
• 关键词: 炭水化物応答性遺伝子; L型ピルビン酸キナーゼ; 転写因子; ChREBP; PGC-1α; 転写調節

本研究では、肝臓における炭水化物応答性遺伝子であるL型ピルビン酸キナーゼ(LPK)遺伝子の転写調節機構を明らかにするために、転写関連因子の相互作用の点から解析を行い、以下の結果を得た。1.LPK遺伝子の炭水化物応答性転写因子であるChREBPが転写共役因子のPGC-1αとin vitroで結合することを見出していたが、GST pulldown assayによりこの結合がChREBPの7-150および659-760領域とPGC-1αの650-797領域の間で起こることを示した。PGC-1αのこの結合はChREBPのLPK遺伝子プロモーターへの結合を阻害し、ChREBPによるLPK遺伝子の転写活性化を抑制した。さらに、この結合は共免疫沈降法により両因子を強制的に発現させた培養細胞中でも起こることを示した。しかし、肝細胞での内因性両因子の間にも同様の結合がみられるかどうかはまだ明らかでない2.肝細胞で発現している転写因子のHexもin vitroでChREBPと結合することが示されたが、強制発現させた培養細胞では認められなかったし、レポーターアッセイでも有意な影響は認められなかった。3.ChREBPの新規結合タンパク質のスクリーニングを2つの方法により行った。1つはGST-ChREBPを作製し、これに結合する特異的なタンパク質を肝臓核抽出物から検索した。もう1つは酵母ツーハイブリドシステムを利用して、肝臓mRNAから検索した。しかしながら、これまでのところ有力な候補となりうるタンパク質の同定には成功していない。

在这项研究中，为了阐明L型丙酮酸激酶（LPK）基因的转录调节机制，肝脏中的碳水化合物反应基因，我们分析了转录相关因子的相互作用，并获得了以下结果。 1。我们发现，LPK基因的碳水化合物响应转录因子Chrebp与转录耦合因子在体外结合，但GST PULLLDOWN测定法显示了这种结合发生在7-150和659-760之间的CHREBP和650-760区和650-7979797-797-797区域之间的结合。 PGC-1α的这种结合抑制了Chrebp与LPK基因启动子的结合，并抑制了Chrebp的LPK基因的转录激活。此外，也表明，这种结合甚至在培养的细胞中也发生，在培养的细胞中，这两个因素都被共同免疫沉淀表达。但是，尚不清楚肝细胞中两个内源性因子之间是否观察到类似的结合。 2。十六进制是在肝细胞中表达的转录因子，也显示出在体外与Chrebp结合，但在强制表达的培养细胞中未发现，并且在报告基因测定中未观察到显着影响。 3。通过两种方法对CHREBP进行新型结合蛋白的筛选。一种是生成GST-CHREBP和搜索肝脏核提取物，以了解与其结合的特定蛋白质。使用酵母双杂交系统从肝mRNA搜索另一个。但是，到目前为止，它尚未成功识别潜在蛋白质。

项目成果

PGC-1α represses ChREBP-activated L-type pyruvate kinase gene transcription

PGC-1α 抑制 ChREBP 激活的 L 型丙酮酸激酶基因转录

• 发表时间: 2007
• 作者: Yamamoto;T.;et. al.;佐藤 伸一
• 通讯作者: 佐藤 伸一

Identification of cis-regulatory elements and trans-acting proteins of the rat carbohydrate response element binding protein gene

大鼠碳水化合物反应元件结合蛋白基因的顺式调节元件和反式作用蛋白的鉴定

• 发表时间: 2007
• 期刊: Archives of Biochemistry and Biophysics 461
• 作者: Hiroki Shimizu;et. al.;Shin-ichi Satoh
• 通讯作者: Shin-ichi Satoh