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イネα-アミラーゼのプラスチド局在化メカニズムの解明

阐明水稻α-淀粉酶质体定位机制

基本信息

批准号：
07J03701
负责人：
古賀彩 (2009, 2011)
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

イネα-アミラーゼI-1ポリペプチド鎖に存在するプラスチド局在化シグナルの同定AmyI-1ポリペプチド鎖の結晶構造解析を行いW302Lの変異が立体構造に与える影響を明らかにするために、大腸菌発現系によるAmy=-1の大量発現と精製を試み、大腸菌発現系で発現されたAmyI-1は、β-シクロデキストリン-アフィニティークロマトグラフィーにより精製できることが確認できました。さらに、結晶構造解析を行うために大量発現・精製を行いました。しかし今回は、結晶構造解析を行うのに十分な大きさの結晶を得ることはできませんでした。より効率的な実験条件を検討し、結晶構造解析を行い、プラスチド局在化シグナルと予測される領域の立体構造を明らかにする計画です。ゴルジ体-プラスチド間コミュニケーションに関わるタンパク質因子の同定と機能解析ゴルジ体-プラスチド間のコミュニケーションのメカニズムを解明するため、AmyI-1のプラスチドへの輸送に関わるタンパク質因子を同定しようとしています。現在、この輸送に関わるタンパク質因子の候補として、2つのタンパク質の解析を進めています。ひとつはプラスチド包膜に存在する膜タンパク質OsLACS9です。OsLACS9-GFPを発現させたタマネギ細胞においてはAmyI-1のプラスチドへの局在化が抑制されるという結果が得られたことから、AmyI-1のプラスチドへの輸送に関わっている可能性があります。もうひとつは、ゴルジ体に存在する膜タンパク質EMP70です。EMP70はAmyI-1を過剰発現させたイネ培養細胞において、その発現量が増加することが示されました。AmyI-1を過剰発現させた細胞では、ゴルジ体の数や形態が変化しており、プラスチドへのタンパク質輸送に特化したゴルジ体が多く存在しているのではないかと考えています。OsLACS9やEMP70のミュータントや発現抑制体を用いて、これらのタンパク質がAmyI-1のプラスチド局在化に与える影響を調べています。まだメカニズム解明には至りませんが、今後、これを足掛かりにして詳細なメカニズムが明らかになることを期待しています。

Analysis of crystal structure of α-AmyI-1 complex in W302L; analysis of crystal structure of AmyI-1 complex in W302L; analysis of β- The crystal structure analysis is carried out in large quantities. The analysis of crystal structure is very important. The analysis of crystal structure, the analysis of crystal structure, the analysis, the analysis of crystal structure, the crystal structure, the analysis, the analysis of crystal structure, the analysis, the analysis of crystal structure, the analysis, The identity and function analysis of the quality factor of the body-to-body interface and the quality factor of the body-to-body interface and the quality factor of the AmyI-1 interface and the transport of the AmyI-1 interface are discussed. Now, this transport is related to the quality of the candidate factor, 2, the quality of the analysis of the progress There is no such thing as a film on OsLACS 9. OsLACS9-GFP expression in the production of AmyI-1 protein in the cell line was inhibited by the inhibition of AmyI-1 protein expression in the cell line.もうひとつは、ゴルジ体に存在する膜タンパク质EMP70です。EMP70 is the first time that AmyI-1 has been detected in cultured cells. AmyI-1 is found in cells that vary in number and morphology, and in cells that specialize in mass transport. OsLACS9 and EMP70 have been used to modulate the effects of AmyI-1 on the development and production of inhibitors. The answer to this question is: