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細胞表層分子ディスプレイ法による細胞への新機能賦与とその分子メカニズムの解明

利用细胞表面分子展示方法赋予细胞新功能并阐明其分子机制

基本信息

批准号：
07J04503
负责人：
松井健
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞表層分子ディスプレイ法を用いて酵母細胞表層にディスプレイすることによって酵母に酸耐性を賦与する新規ペプチド(TLRVSFLSLRAYLLLRSVSQQLYLD)の酸耐性賦与メカニズムの解明を目指して研究を行った。まず、昨年度に引き続き、様々な細胞表層タンパク質遺伝子の破壊株を用いて、ペプチドと相互作用する可能性のあるタンパク質の探索を行ったが、相互作用するタンパク質を見つけることはできなかった。そこで、ペプチドをディスプレイした酵母は細胞内へグルコースを効率的に取り込むことを昨年度に明らかにしていたので、グルコースの取り込みと酸耐性の関係を明らかにするために、低グルコース培地での生育を調べ、ペプチドをディスプレイした酵母は低グルコース培地でコントロール株よりも良い生育を示すことを確認した。また、培地のpHを通常より高くしたところ、ペプチドをディスプレイすることで、コントロール株よりも生育が悪くなり、ペプチドをディスプレイすることで、至適pHが酸性側にシフトすることが分かった。そこで、グルコースによる影響を軽減するためにグルコース濃度を低くしたところ、ペプチドディスプレイによる生育の悪化が改善され、グルコース取り込み能の強化がペプチドディスプレイによる酸耐性化に関与していることが分かった。このことから、ディスプレイしたペプチドによる酸耐性獲得機構と、よく知られている酵母での細胞内グルコース濃度の上昇によりキナーゼが細胞膜プロトンポンプを活性化し、プロトンの排出を活性化する機構との関連を推定することができた。そして、酵母に酸耐性を賦与するための新たな標的を見出すことができた。

The cell surface molecule method was used in the yeast cell table, the yeast acid tolerance, the yeast acid tolerance, the new rules, the acid tolerance (TLRVSFLSLRAYLLLRSVSQQLYLD), the acid tolerance and the understanding. In the last year, the cell table was broken in terms of the possibility of interaction, and the possibility of interaction. The rate of intracellular infection in yeast was determined in the first half of the year. Yesterday, it was found that there was a difference in acid tolerance between the two groups. Please tell me that the yeast is low, so that the soil can be cultivated, and the plant will have a good fertility. In general, pH is used to treat children, women, children, children, In the first place, there is a difference between acid tolerance and acid tolerance in order to improve fertility and improve fertility. In this study, the acid tolerance test was performed in the presence of acid tolerance, and the cell membrane was activated in the cell membrane of yeast. The cell membrane was activated, and the activation mechanism was presumed. The acid tolerance of the yeast and the acid tolerance of the yeast can be seen in the new yeast.