酢酸耐性機構の分子生物学的研究

醋酸耐受机制的分子生物学研究

• 批准号: 03F03766
• 负责人: 松下 一信
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F03766/
• 关键词: 酢酸耐性; アルコール脱水素酵素; 高度酢酸耐性酢酸菌; 中度酢酸耐性酢酸菌; RT-PCR; 細胞質膜タンパク質; トランスポゾン

酢酸菌はエタノールを酸化して酢酸を高濃度に培地中に蓄積する。そのため、他の細菌にみられない高い酢酸耐性能を有している。この酢酸耐性能は、ヨーロッパで酢酸発酵に用いられる高度酢酸耐性菌(15%もの蓄積)と日本国内で用いられる中度酢酸耐性菌(5-6%の蓄積)で大きく異なっている。本研究では、この高度酢酸耐性菌と中度酢酸耐性菌の酢酸耐性機構を比較研究し、酢酸菌の酢酸耐性機構と関与する遺伝子を明らかにするとともに、この酢酸耐性と酢酸生成に関与するアルコール脱水素酵素(ADH)との関係を明らかにすることを目的として行われた。1.高度酢酸耐性菌と中度酢酸性菌のADHの比較:前年度、3種類の高度酢酸耐性菌の細胞膜からADHを分離精製し機能解析を行った結果、これらの酵素は中度酢酸耐性菌の酵素とその性質に大きな違いは見られなかったが、酢酸に対して高い安定性を示すこと、その発現量が大幅に高くなっていることが明らかとなった。そこで、今回これらの発現量をRT-PCRにより解析したが、その発現に大きな上昇は見られなれなかったため、高度耐性菌のADHはmRNAの安定性が中度耐性菌のそれと比べて高いものと判断された。2.高度酢酸耐性菌にみられる95KDaタンパク質:前年度に、高度酢酸耐性菌の酢酸発酵条件下で酢酸濃度の上昇とともに増加していることが明らかとなった95kDaタンパク質のさらなる解析を行った。膜画分をショ糖密度勾配遠心で解析したところ、このタンパク質は細胞質膜に局在することが明らかとなった。また、そのタンパク質を特定するため、N末端アミノ酸配列およびCnBr分解ペプチドのアミノ酸配列分析を行った。その結果、一部のペプチドに多剤耐性因子に相同性を示すものが見つかった。今後このタンパク質の機能解析をさらにすすめる予定である。

The sorrel bacteria are acidified, the sorrel acid is high, and the soil is stored in the soil. The resistance to oxalic acid is higher than that of other bacteria in order to improve the acid tolerance. Oxalic acid tolerance, oxalic acid fermentation, highly oxalic acid-tolerant bacteria (15%), domestic oxalic acid-tolerant bacteria (5-6%), domestic oxalic acid-tolerant bacteria (5-6%). In this study, high acid tolerance bacteria, moderate sorrel tolerance bacteria, sorrel acid tolerance mechanism, sorrel acid tolerance mechanism, sorrel acid tolerance bacteria, sorrel acid 1. Highly oxalic acid-tolerant bacteria moderate enteric acid bacteria ADH comparison: in the previous year, 3 years old, high acid-tolerant bacteria cell membrane isolation ADH isolates were able to analyze the results, enzymes of moderate sorrel-tolerant bacteria, mild sorrel-tolerant bacteria, medium-acid-tolerant bacteria, moderate sorrel-tolerant bacteria, moderate sorrel There is a big increase in the amount of money. This time, we need to measure the amount of RT-PCR. This time, we need to determine the stability of highly resistant bacteria, the stability of moderately resistant bacteria, the stability of highly resistant bacteria, the stability of moderately resistant bacteria, the stability of highly resistant bacteria, the stability of moderately resistant bacteria, the stability of highly resistant bacteria, and the stability of moderately resistant bacteria. two。 Highly oxalic acid-tolerant bacteria, 95KDa bacteria, sorrel acid-tolerant bacteria, highly oxalic acid-tolerant bacteria, sorrel acid-tolerant The membrane is divided into two parts: sugar density, sugar density, heart, sugar density, sugar density and heart. In this paper, we use the following methods to analyze the specific phenotype, the N-terminal, the acid column, the CnBr decomposition, the acid column analysis, the row column. The results showed that the similarity of multiple tolerance factors showed that there was no significant difference between the results and the results. In the future, we will be able to analyze the predetermined information.

项目成果

Correlation between acetic acid resistance and characteristics of PQQ-dependent ADH in acetic acid bacteria

• DOI: 10.1007/s00253-005-0073-z
• 发表时间: 2006-04-01
• 期刊: APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY
• 影响因子: 5
• 作者: Trcek, J;Toyama, H;Matsushita, K
• 通讯作者: Matsushita, K

Survival and Death in Bacteria (Acetic acid production in acetic acid bacteria leading to their ‘death' and survival)

细菌的生存和死亡（乙酸细菌中的乙酸产生导致其“死亡”和生存）

• 发表时间: 2005
• 作者: K.Matsushita;T.Inoue;O.Adachi;H.Toyama;K.Matsushita et al.;H.Toyama et al.;K.Matsushita et al.
• 通讯作者: K.Matsushita et al.

Survival and Death in Bacteria (Acetic acid production in acetic acid bacteria leading to their "death" and survival)

细菌的生存和死亡（乙酸细菌中的乙酸产生导致其“死亡”和生存）

• 发表时间: 2005
• 作者: K.Matsushita;T.Inoue;O.Adachi;H.Toyama;K.Matsushita et al.;H.Toyama et al.;K.Matsushita et al.;K.Matsushita et al.
• 通讯作者: K.Matsushita et al.

Acetobacter aceti possesses a proton motive force-dependent efflux system for acetic acid

• DOI: 10.1128/jb.187.13.4346-4352.2005
• 发表时间: 2005-07-01
• 期刊: JOURNAL OF BACTERIOLOGY
• 影响因子: 3.2
• 作者: Matsushita, K;Inoue, T;Toyama, H
• 通讯作者: Toyama, H