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試験管内ES細胞分化誘導系を用いて同定した新規リン酸化酵素遺伝子の機能解析

使用体外 ES 细胞分化诱导系统鉴定的新型磷酸化酶基因的功能分析

基本信息

批准号：
07J08069
负责人：
木下将樹
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J08069/
关键词：
ES細胞リン酸化酵素 Vlk ゴルジ体膜輸送 HABP1 ノックアウトマウス口蓋裂骨化遅延

项目摘要

ノックアウトマウスの表現型としては口蓋裂および肺の低形成が明らかとなっていた。当期ではそれに加え、新たな表現型として軟骨細胞の成熟遅延を発見した。正常個体では胎生14日目には前肢の上腕骨において軟骨細胞の肥大化が始まることが確認できるが、同腹のノックアウト個体では肥大化した軟骨細胞の存在は認められない。しかし、ノックアウト個体においても胎生16日目には軟骨細胞の肥大化が始まることを明らかとした。同定した分子はその配列解析の結果、脊椎動物間にしか存在せず、またその酵素ドメインは現在既知で解析が行われているどの酵素ドメインとも相同性を持だない分子であることが明らかとなった。そこで我々はこの分子をVlk(Vertebrate lonesome kinase)と命名した。当初は結合タンパク質を同定し、そこからVlkの機能にを明らかにしようと試みたが、同定した分子からは解析が進まなかった。そこで、ノックアウトマウ不の表現型と同様の表現型をもたらす遺伝子変異に着目して調べるとFGF18,Aggrecanの2つが表現型を同様に起こすことが報告されていた。Vlkはゴルジ装置に局在することより、この分子の機能として、細胞外に分泌されるタンパク質の輸送経路に何らかの関わりがあるのではないかとの仮説を立てた。この仮説を検証するために水疱性口内炎ウイルスのエンペロープ糖タンパクの温度感受性変異体であるts045にGFPを付加したVSVG-GFPを用いて小胞輸送の解析を行ったところ、NIH3T3株においてVSVG-GFPとVlkを同時に発現させるとVSVG-GFPの輸送がゴルジ装置内で異常になりゴルジ装置に留まることが明らかとなった。この研究はタンパク質の分泌が発生過程において動的に制御されており、組織形成における細胞外環境の構築に必須であるということを明らかにしたという点で重要な研究である。

ノックアウトマウスのphenomenon としては Mouth cleft およびpulmonary のlow formation が明らかとなっていた. The current period is the same, the new phenotype is the mature chondrocyte, and the growth rate is 100%. Normal individuals are born after 14 days of viviparous life, and the cartilage cells of the upper wrist of the forelimb are hypertrophic. Confirm the presence of hypertrophic chondrocytes in the same abdominal のノックアウト individual.しかし, ノックアウトIndividual においてもviviparous 16-day eye にはchondrocyte hypertrophy がまることを明らかとした. The results of the same molecular arrangement analysis, the existence of vertebrates, and the enzymes are now available Know the analysis and analysis of the enzyme and the enzyme and the identity of the molecule and the molecule.そこで我々はこのmolecule をVlk(Vertebrate lonesome kinase)とnamed した. At the beginning, it was a combination of the same quality as the original material and the functional function of the Vlk.かにしようとtest みたが、同定したmolecule からはanalytic が入まなかった.そこで、ノックアウトマウ不のphenotypeと同様のphenotypeをもたらす伝子変differentに目して片べるとFGF18, Aggrecan の2つがphenotype を同様に出こすことが report されていた. The function of the Vlk device is in the system, the function of the molecule, and the secretion outside the cell.れるタンパク性の Transportation経路に何らかの关わりがあるのではないかとの仮说を立てた.この仮说を検证するためにvesicular endostomatitis ウイルスのエンペロープsugar タンパクのThermosensitivity 変Allogeneic であるts045にGFPをaddedしたVSVG-GFPをanalyzed using いてcell deliveryを行ったところ、NIH3T3 strain においてVSVG-GFP and とVlkをAt the same time, に発appears させるとVSV There is an abnormality in the G-GFP transport device.このResearch on the secretion and production of substances, the control of movement, and the formation of tissues The construction of the extracellular environment is an important and important research point.