ヒト脂肪組織由来血管前駆細胞および中胚葉系幹細胞の再生療法への応用

人体脂肪组织来源的血管祖细胞和中胚层干细胞在再生治疗中的应用

基本信息

批准号：
07J52613
负责人：
田浦大輔
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J52613/
关键词：
SVF 脂肪分化アデノシン CD73 体性幹細胞

项目摘要

脂肪組織から脂肪細胞を除いて得られるSVFをフローサイトメトリーを用いて解析し、これらの中に含まれていると考えられている間葉系幹細胞の同定・単離を目指した。各間葉系幹細胞マーカーの発現群、非発現群に分け、それぞれに対して脂肪誘導をかけることにより、各マーカー陽性、陰性群での脂肪誘導効率を比較検討した。この結果、CD73(+)細胞はCD73(-)細胞に比し顕著に脂肪誘導効率が高く、他のマーカーにおける差異よりも大きかった。CD73(+)細胞群の詳細な解析をおこなった結果、CD73(+)細胞は同時にCD90、CD105、CD166を発現、一部がCD34を発現し、CD45非発現の均一な細胞集団であることが判明し、これは骨髄由来間葉系幹細胞で提唱されている性質とほぼ一致しており、脂肪組織から間葉系幹細胞を単離・同定する際にCD73が単独でも使用できる有用な間葉系幹細胞マーカーであることが判明した。次に脂肪再生療法への応用を目指し、in vivoでの移植実験を行い、CD73(+)細胞を用いた場合に移植効率が高いことを示した。CD73はAMPをアデノシンに変換する働きを持つ酵素、ecto-5'-nuclreosidaseであり、またアデノシンが脂肪細胞に対するインスリン作用の増強や脂肪分解抑制作用を持つことは広く知られている。このため、CD73が機能的にも脂肪組織内の幹細胞→成熟脂肪細胞への分化に関わっている可能性を考え、SVFを用いて脂肪分化誘導にアデノシンアゴニスト、アンタゴニストが影響を与えるかどうかを検討した。結果、アデノシンアゴニストを添加するとSVFからの脂肪誘導は充進し、アンタゴニストを添加すると脂肪誘導は抑制された。CD73が脂肪組織内での脂肪分化に機能的意義を持つ可能性を示せたと考える。

使用流式细胞仪分析通过从脂肪组织中去除脂肪细胞获得的SVF，其目的是识别和分离被认为包含在其中的间充质干细胞。通过将每个间充质干细胞标记分为表达组和非表达组，每个组是脂肪诱导的，比较了每个标记中脂肪诱导的效率，并比较每个标记中的脂肪诱导效率和阴性。结果，CD73（+）细胞的脂肪诱导效率明显高于CD73（ - ）细胞，并且大于其他标记。对CD73（+）细胞群的详细分析表明，CD73（+）细胞同时表达了CD90，CD105和CD166，有些表达CD34，并且一个均匀的细胞种群未表达CD45，几乎与骨骼植物的细胞和有用的细胞相一致，该性质几乎是一致的。来自脂肪组织的间充质干细胞。接下来，为了将其应用于脂肪再生疗法，我们进行了一个体内移植实验，表明当使用CD73（+）细胞时，移植效率很高。 CD73是Ecto-5'-核苷酶，一种将AMP转化为腺苷的酶，众所周知，腺苷对胰岛素对脂肪细胞具有增强的胰岛素作用，并抑制脂解。因此，考虑到CD73在脂肪组织内部从干细胞到成熟的脂肪细胞的分化可能性，我们研究了使用SVF腺苷激动剂和拮抗剂对诱导adipo分化有效。结果，腺苷激动剂的添加增强了SVF的脂肪诱导，拮抗剂的添加抑制了脂肪的诱导。我们认为，CD73可以证明它可能具有脂肪组织内脂肪分化的功能意义的可能性。