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analysis of water channel function to decrease of brain edema caused by mild hypothermia with using RNAi technique

RNAi技术分析水通道功能减轻亚低温脑水肿的作用

基本信息

批准号：
18591714
负责人：
FUJITA Yoshihito
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18591714/
关键词：
水チャンネル脳浮腫 RNAi アクアポリン脳低温ノックダウン脳低温療法

项目摘要

今後の研究の基礎となるアクアポリン(AQP)Knockdown細胞株の確立を重点に行った。Knockdownが確認されているconstructに加えオリジナルのものを作成した。vectorには、invitrogen社製のBlock-IT Pol II miR RNAi expression vector、pcDNA 6.2-GW/miRを使用した。そのプラスミドを大腸菌にtransformationして、大量培養し、Quiagen社のキットを用いて、目的となるconstructを含むプラスミドを大量に、無菌的に精製した。RNAiの効果を確認するが効果が弱く、原因の追求のためGFPをvectorに挿入した。そのGFPつきのvectorの挿入で、視覚的におおざっぱにいって20%ぐらいのtranfection効率があることを確認した。ただRNAi効果をえる効率は、まだ10%程度にとどまった。transfection効率をあげるためレンチウイルスを使用したvectorの作製を進めると同時に、現在作成してあるGFPつきvectorを用い。実際の低温における脳浮腫効果の解明を始めている。また、同時に疾患の重傷度の指標として注目している乳酸値について、乳酸負荷でのアストロサイトにおける水チャンネルの発現の変化についても解析し、論文発表した。

In the future, <s:1> research <s:1> on the basis of となるア, アポリ, アポリ (AQP)Knockdown cell lines <e:1> will establish を key に lines った. Knockdownが confirms that されてされてるるconstructに plus えリジナリジナされて <s:1> ををを makes たた. vectorにに, invitrogen production of <s:1> Block-IT Pol II miR RNAi expression vector, pcDNA 6.2-GW/miRを use たた. そのプラスミドを coliform に transformation して, cultivating many し, Quiagen のキットを with いて, purpose となる construct を containing むプラスミドをに, sterile に refined した. The effect of RNAi を confirms that the effect of するが is が weak く, and the cause is the pursuit of <s:1> GFPをvectorに to enter たた. その GFP つきの vector の scions into で, regard 覚におおざっぱにいって 20% ぐらいの tranfection sharper rate があることを confirm した. The effect of ただRNAi is をえる, the effect rate is をえる, and the degree of まだ10% is にとまったまったまった. Transfection rate of unseen をあげるためレンチウイルスを use した vector を into the の cropping めるとに at the same time, now done してある GFP つき vector をい. The actual effect of <s:1> hypothermia における脳 edema is revealed that を begins with めてるる. またの seriously injured degree, at the same time に disease の index として attention している lactic acid numerical について, lactic acid load でのアストロサイトにおける water チャンネルの発の now - the についても analytical し, paper 発 table した.