ハンチントン病病態関連遺伝子のゲノムワイドスクリーニング

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ハンチントン病はその原因遺伝子にCAGリピートの伸長が存在し、その転写産物の伸長ポリグルタミンが発症に強く寄与していると考えられている。この伸長ポリグルタミンを含む遺伝子産物は核内に凝集体形成を引き起こし、これが発症に強く関わっているのではないかと考えられている。近年遺伝子発現を特異的に抑制するsiRNAが利用可能となり、shRNAとして細胞への導入が容易になっている。また多くの遺伝子をカバーするshRNAの利用が可能となり、アッセイ系が確立すれば全ゲノムレベルでの遺伝子抑制による凝集体形成に対する影響をスクリーニングすることが可能となっている。本研究では凝集体形成を抑制するshRNAのスクリーニングを行い、凝集体形成に影響する遺伝子を同定することにより、凝集体形成に関与するカスケードの同定を目指す。1)ハンチンチンエクソン1(伸長CAGリピートを含むもの)をGFPと結合した蛋白を発現する系を用いて、この凝集体形成についてshRNAの影響をアッセイする系をArrayScanを用いて確立した。15000クローン(全遺伝子の1/3)をスクリーニングした。2)shRNAライブラリーは市販のものを用い、検討した範囲で遺伝子抑制が十分行われることを確認した。150Q発現細胞の凝集体抑制効果のあるshrNA682クローンを得た。3)これから16Qの発現に影響を与えない322クローンを選択した。4)150Q細胞でスクリーニングで選択した682遣伝子のうち369遺伝子について全長遺伝子の発現ベクターを得たのでこの効果がshRNAと対応するかどうかを検討し、43クローンがshRNAと対応する効果を示すものであることがわかった。5)スクリーニングで得られた遺伝子の機能解析を予定している。