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海産無脊椎動物ホヤにエストロゲンが与える影響の分子生物学的解析とその応用

雌激素对海洋无脊椎动物、海鞘作用的分子生物学分析及其应用

基本信息

批准号：
18710052
负责人：
小柳亮
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18710052/
关键词：
内分泌かく乱物質 DNAマイクロアレイ

项目摘要

昨年度に引き続き、エストロゲンに被曝したホヤにおける遺伝子発現の変動をDNAマイクロアレイ法により解析した。今年度は、昨年までの解析によりエストロゲン被曝の影響が比較的現れやすいことが示唆された遺伝子群について、より多くの試料を用いて精度の高い解析を行うことを目標とした。そこで、まずこれらの遺伝子群から既にcDNA全長の塩基配列が公共データベース(DDBJ、 GenBank、 EMBL)に報告されているものを中心に327個を選定して、これら遺伝子群を搭載した新規のcDNAマイクロアレイを独自に作製した。次に、このcDNAマイクロアレイを用いて以下に述べる解析を行った。まず、被曝開始後の時間経過に伴う発現変動の様子を調べるため、17β-エストラジオール(E2)を添加した天然海水中でカタユウレイボヤ成体を飼育する実験を行い、実験開始後6時間、24時間、3日、7日、14日の各時点にサンプリングした合計60個体における遺伝子発現を観測した。この結果から特異的な発現パターンを示す遺伝子群を抽出したところ、実験開始後3日目までは発現量が増加し、その後減少に転じる遺伝子群が存在することが明らかになった。また、異なるエストロゲン濃度についてホヤに与える影響の程度を調べるために1nMおよび100nMのE2を添加した海水で飼育した個体における遺伝子発現を観測して比較したところ、これら2つの条件は有意な差を生じないことが示された。これらの結果は未解明な点が多い海産無脊椎動物に対する内分泌かく乱物質の影響を調査する際に一定の指標を与えるものである。

Last year's DNA analysis revealed that the gene was involved in the development of DNA. This year's analysis of the impact of exposure is now available for use with high accuracy. 327 cDNA sequences were selected from the list of reported cDNA sequences (DDBJ, GenBank, EMBL), and the new cDNA sequences were prepared independently. The analysis of the cDNA sequence is described below During the breeding process, the number of individuals detected at 6, 24, 3, 7, and 14 days after the start of exposure was 60 in total. The result is that the number of unique occurrences increases and decreases 3 days after the start of the event, and the number of occurrences increases and decreases 3 days after the event. In addition to 1nM and 100nM of E2, seawater was added to the culture medium to determine the occurrence of the pathogen. The results show that there are many factors affecting the endocrine function of marine invertebrates.