心筋前駆細胞株を用いた新規心筋分化誘導因子の同定

使用心脏祖细胞系鉴定新型心脏分化诱导因子

• 批准号: 18890200
• 负责人: 松浦 勝久
• 金额: $ 1.77万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890200/
• 关键词: Sca-1; 心筋前駆細胞; 細胞シート

1)心臓Sca-1陽性細胞株を用いた心筋分化誘導法の確立心臓由来Sca-1陽性細胞株は、通常の培養条件時にすでに、心筋選択的転写因子であるCsx/Nkx2.5及びGATA4を発現しており、心筋前駆細胞株と考えられる。この細胞を、4週間密な状況下で培養を継続することにより、新たにMEF2C、ANP、myosin heavy chainをmRNA及び蛋白レベルで発現することが確認された。2)心臓Sca-1陽性細胞株細胞シートを用いた細胞移植の検討レトロウイルスを用いてRFP(Red Fluorescent Protein)を遺伝子導入したSca-1陽性細胞株を、温度感受性培養皿に播種し、約5日間で、単層の細胞シートを回収することができた。この細胞シートを用い、心筋梗塞作成直後に細胞移植を行い、経時的な心機能の変化を、心臓超音波検査を用いて検討を行った。その結果、細胞シート移植群においては、非移植群に比して著しく左室拡張末期径、左室収縮末期径の拡大の抑制、左室短縮率の改善効果を認めた。3)心臓Sca-1陽性細胞株を用いた新規心筋分化関連転写因子の同定ヒト心臓cDNAlibraryより得られる大腸菌クローン100個分を1個のsmall poolとし、計180smallpool(18,000クローン分)より各々DNA抽出する。ANP-1uciferaseplasmidと各smallpoo1由来DNAを同時に遺伝子導入し、24時間後にluciferaseの活性をルミノメーターを用いて測定を行った。スクリーニングの結果、ANPプロモーターを活性化しうる遺伝子の単離に成功した。シークエンスの結果、これまで心筋分化について報告されておらず、新規の心筋分化関連遺伝子と考えられ、今後Sca-1細胞株及び、各種組織幹細胞への遺伝子導入実験を行い、心筋分化能について検討予定である。

1) positive cell lines を heart perforatien Sca - 1 with い た heart muscle differentiation candidated の establish positive cell lines は heart perforatien origin Sca - 1, usually の culture conditions when に す で に, heart muscle sentaku planning write factor で あ る Csx/Nkx2.5 and び GATA4 を 発 now し て お り 駆 before, heart muscle cell lines と exam え ら れ る. を こ の cells, between 4 weeks で な situations develop を 継 続 す る こ と に よ り, new た に MEF2C, ANP, myosin heavy chain を mRNA and protein び レ ベ ル で 発 now す る こ と が confirm さ れ た. 2) positive heart perforatien Sca - 1 cell line cells シ ー ト を with い た cell transplantation の beg レ 検 ト ロ ウ イ ル ス を with い て RFP (Red Fluorescent Protein) を posthumous son 伝 import し た positive cell lines を Sca - 1, temperature sensibility petri dish に seeding し, about 5 day で, の 単 layer cells シ ー ト を back 収 す る こ と が で き た. こ の cells シ ー ト を い, heart muscle infarction made straight line を い に cells after transplantation and 経 な heart function when の is crucial - を, heart ultrasound 検 check を with い て 検 line for を っ た. そ の results, cell シ ー ト transplantation group に お い て は, non に transplantation group than し て in し く left ventricular late company, zhang diameter, left ventricular late 収 shrink diameter の company, big の inhibition, left ventricular shortening rate の improve working fruit を recognize め た. 3) The cardiac Sca-1 positive cell line を used the を た new regulation of cardiotendon differentiation association 転 to write the factor <s:1> homologous to the ヒト cardiac cDNAlibraryよ を to obtain られる escherichia coli <s:1> ロ <s:1> <s:1> を 100 points を1 case small poolと と, count 180small pools (18,000 ロ よ <e:1> points)よ each 々DNA was extracted する. ANP - 1 uciferaseplasmid と each smallpoo1 origin DNA を also に 伝 import し, 24 time after に luciferase activity の を ル ミ ノ メ ー タ ー を with い て line measurement を っ た. ス ク リ ー ニ ン グ の results, ANP プ ロ モ ー タ ー を activeness し う る posthumous son 伝 の 単 from に successful し た. シ ー ク エ ン ス の results, こ れ ま で heart muscle differentiation に つ い て report さ れ て お ら ず, new rules の heart muscle differentiation masato even survived 伝 と exam え ら れ, Sca - 1 cell lines and in the future び, all kinds of tissue stem cells へ の posthumous son 伝 import be 験 を い, heart muscle differentiation can に つ い て 検 for designated で あ る.

项目成果

Critical Roles of Muscle-Secreted Angiogenic Factors in Therapeutic Neovascularization

• DOI: 10.1161/01.res.0000219901.13974.15
• 发表时间: 2006-05
• 期刊: Circulation Research
• 影响因子: 20.1
• 作者: Kaoru Tateno;T. Minamino;H. Toko;H. Akazawa;N. Shimizu;S. Takeda;T. Kunieda;Hideyuki Miyauchi

成体マウス心筋幹細胞の単離、同定と心筋への分化過程の解明

成年小鼠心脏干细胞的分离鉴定及心肌分化过程的阐明

• 发表时间: 2006
• 期刊: 心臓 38(12)
• 作者: Tateno K;Minamino T;Toko H;Akazawa H;Shimizu N;Takeda S;Kunieda T;Miyauchi H;Oyama T;Matsuura K;Nishi J;Kobayashi Y;Nagai T;Kuwabara Y;Iwakura Y;Nomura F;Saito Y;Komuro I;松浦勝久
• 通讯作者: 松浦勝久

Cardiac side population cells have a potential to migrate and differentiate into cardiomyocytes in vitro and in vivo.

心脏侧种群细胞有可能在体外和体内迁移并分化为心肌细胞。

• DOI: 10.1083/jcb.200603014
• 发表时间: 2007-01-29
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Oyama T;Nagai T;Wada H;Naito AT;Matsuura K;Iwanaga K;Takahashi T;Goto M;Mikami Y;Yasuda N;Akazawa H;Uezumi A;Takeda S;Komuro I
• 通讯作者: Komuro I