Analysis of mRNP remodeling during NMD

NMD过程中mRNP重塑分析

• 批准号: 19770151
• 负责人: 山下 暁朗
• 金额: $ 2.44万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19770151/
• 关键词: 遺伝情報複製; 転写装置; 再編; 制御

本研究により、動物細胞内からの高精度mRNP複合体精製システムを新たに構築することに成功した。具体的には、mRNP精製のためのタグであるBoxB配列を挿入したbeta-globin遺伝子由来のmRNA(翻訳型mRNA)とその5'非翻訳領域に翻訳開始を阻害する強固なステムループを形成する配列を挿入した遺伝子由来のmRNA(非翻訳型mRNA)をmRNP精製アフィニティータグを用いて精製した。mRNP精製アフィニティータグとして、BoxB結合ペプチドであるバクテリオファージNタンパク質(Nペプチド)にStreptavidin binding peptide(SBP)とGSTとFlag epitope tagを融合した物を使用した。この解析により、動物細胞内で翻訳中のリボソームが結合したmRNP(リボソーム、翻訳伸張因子を含む、スプライシング依存的mRNA結合タンパク質複合体であるEJCを含まない)と翻訳されていないmRNP(EJCをふくむ、リボソーム翻訳伸張因子を含まない)の構成因子が大きく異なることを生化学的に明らかとした。この結果は、動物細胞内で翻訳依存的にmRNPの大きな再構成が起こるということを初めて示した物である。

In this study, we successfully constructed a novel high-precision mRNP complex in animal cells. Specifically, mRNP is refined to include beta-globin gene origin mRNA(inverted-type mRNA) and 5'non-inverted-type mRNA, which is resistant to inverted-type gene origin mRNA(non-inverted-type mRNA) and mRNP is refined to include beta-globin gene origin mRNA. mRNP refined the use of Streptavidin binding peptide(SBP) and GST and Flag epitope tag in the BoxB junction. The analysis of this protein, the expression of protein in the cell, the expression of protein in the cell. As a result, animal cells are dependent on mRNP for large amounts of recombination.

项目成果

Versatile applications of transcriptional pulsing to study mRNA turnover in mammalian cells

• DOI: 10.1261/rna.663507
• 发表时间: 2007-10-01
• 期刊: RNA
• 影响因子: 4.5
• 作者: Chen, Chyi-Ying A.;Yamashita, Yukiko;Shyu, Ann-Bin
• 通讯作者: Shyu, Ann-Bin

Translation Termination Complex During Nonsense-Mediated MRNA Decay

无义介导的 mRNA 衰变过程中的翻译终止复合体

• 发表时间: 2008
• 作者: Yamashita A;Izumi N;Kashima I;Katsuhata Y;Muramatsu R;Ohno S
• 通讯作者: Ohno S

Distant N- and C-terminal domains are required for intrinsic kinase activity of SMG-1, a critical component of nonsense-mediated mRNA decay

• DOI: 10.1074/jbc.m610159200
• 发表时间: 2007-03-16
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Morita, Tomoko;Yamashita, Akio;Ohno, Shigeo
• 通讯作者: Ohno, Shigeo

The formation of SMG-1 : Upfl : eRF1 : eRF3 complex (SURF) on ribosomes precedes translation-dependent-Upfl phosphorylation during nonsense-medi ated mRNA decay

在无义介导的 mRNA 衰变期间，核糖体上 SMG-1 : Upfl : eRF1 : eRF3 复合物 (SURF) 的形成先于翻译依赖性 Upfl 磷酸化

• 发表时间: 2008
• 作者: Yamashita A;Kashima I;Izumi N;Katsuhata Y;Muramatsu R;Ohno S
• 通讯作者: Ohno S

The formation of SMG-1 : Upf1 : eRF1 : eRF3 complex (SURF) on ribosomes precedes translation dependent Upf1 phosphorylation during nonsense-mediated mRNA decay

在无义介导的 mRNA 衰变过程中，核糖体上 SMG-1 : Upf1 : eRF1 : eRF3 复合物 (SURF) 的形成先于翻译依赖性 Upf1 磷酸化

• 发表时间: 2008
• 作者: Yamashita A;Kashima I;Izumi N;Katsuhata Y;Muramatsu R;Ohno S
• 通讯作者: Ohno S