発達過程の生殖細胞におけるp51(別名p63)の機能と制御機構の解析

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p63は癌抑制遺伝子であるp53ファミリーのメンバーの一つである。p53がほぼ全ての細胞で機能しているのに対しp63は皮膚や四肢などでの組織特異的な機能が知られている。p63には機能の異なる複数のisoformが存在し、皮膚の組織ではこれらisoformのバランスが上皮幹細胞の分化や生死を制御する。p63はマウス胚の生殖細胞にも発生過程早期から選択的に発現していることから、生殖細胞でも一部のisoformが幹細胞で機能し、分化の制御に関与していることも予想されるが詳細は不明である。そこで本研究では、p63 isoformが発達過程の未分化な生殖細胞の分化や生死の制御に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。分化誘導系には、mouse vasa homolog-venus(又はRFP)の蛍光で始原生殖細胞(PGC)の分化をモニターできるES細胞を利用し、Max遺伝子のノックダウンによる後期PGC様細胞(PGCLC)誘導法、EpiLCを介した前期PGCLC誘導法、の2種類を用いた。分化誘導時に、各isoformの過剰発現およびshRNAなどを用いた機能阻害を行い、vasa陽性細胞の形成および分化マーカー遺伝子群の発現を解析した。その結果、いずれの分化誘導法においても仏タイプのp63の発現はPGC形成に抑制的に働くことが示唆され、p63 isoformはPGCLCの分化や増殖を制御する可能性が示された。一方、自然発生的な細胞死および薬剤投与によるDNA損傷により誘導される細胞死についてp63 isoformの影響を解析した結果、p63によるPGCLC細胞死への影響は認められなかった。これらの結果より、p63 isoformは発達過程の生殖細胞でも一部のisoformが幹細胞で機能し、分化や増殖の制御を担っている可能性が示された。