精子のカルシウム濃度調節と卵接着に関わる新規マイクロドメイン　局在糖タンパク質

参与精子钙浓度调节和卵子粘附的新型微区定位糖蛋白

• 批准号: 12J10675
• 负责人: 金澤 尊
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J10675/
• 关键词: 糖鎖; マイクロドメイン; 精子; カルシウムイオン

本研究ではブタ精子マイクロドメインから見出された糖タンパク質WGA-gpの構造と機能解析を行なっている。本年度は、cDNAクローニングによるWGA-gpのタンパク質構造解析を行なった。WGA-gpの発現組織解析を行なった結果、精巣上体尾部の上皮細胞で生合成されることを明らかにした。そこで、精巣上体からcDNAライブラリーを作製し、PCR法によってcDNAクローニングを行なった結果、得られた配列はブタCD52のcDNA配列と一致した。これは63アミノ酸残基からなり、N末端にシグナルペプチドを、C末端にGPIアンカーシグナルを有していることが示された。WGA-gpはGPIアンカーを切断する酵素PI-PLCに、感受性を示した。これまでの結果から、WGA-gpはブタCD52の成熟タンパク質で、10アミノ酸残基からなるGPIアンカータンパク質であり、3つの糖鎖付加部位を持つことを明らかにした。さらに、この糖鎖構造をレクチンや質量分析によって解析した結果、N型糖鎖に末端α-GalとコアFuc残基が存在し、O型糖鎖には硫酸基が存在することを示唆した。本研究によって、初めてブタの精子からCD52を見出し、そのタンパク質と糖鎖構造を実験的に明らかにした。またWGA-gpは、その糖鎖に特異的な抗体mAb.4D1を添加することで、細胞内カルシウム濃度が変動することから、カルシウム制御機構を調節していると考えられる。mAb.4D1とカルシウムポンプやチャンネルに対する阻害剤を同時に用いて、細胞内カルシウム濃度を測定した結果、L-typeのカルシウムチャンネルとPMCAポンプに対する阻害剤で、抗体の影響が抑制された。この結果から、WGA-gpは糖鎖を介して、これらの分子を調節している可能性が示された。この細胞内カルシウム調節の機能は、CD52の機能として、初めて提唱された機能である。

This study で は ブ タ sperm マ イ ク ロ ド メ イ ン か ら shows さ れ た sugar タ ン パ ク qualitative WGA - gp の tectonic line と function analytical を な っ て い る. In this year, を, cDNA ロ ロ ニ グによる グによる グによる グによる グによるWGA-gp タ タ パ パ <s:1> mass structure analysis を lines なった. Tissue analysis of WGA-gp <s:1> occurrence: を row なった result, spermatogenic upper body tail <s:1> epithelial cells で synthesize される <s:1> とを light ら に に た た. そ こ で and fine 巣 upper か ら cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し, PCR method に よ っ て cDNA ク ロ ー ニ ン グ を line な っ た results, and ら れ た match column は ブ タ CD52 の cDNA match column と consistent し た. 63 ア こ れ は ミ ノ acid residues か ら な り, N terminal に シ グ ナ ル ペ プ チ ド を, C terminal に GPI ア ン カ ー シ グ ナ ル を have し て い る こ と が shown さ れ た. WGA-gp <s:1> GPIア カ カ を を を cuts off する enzyme PI-PLCに and sensitivity を indicates た た. こ れ ま で の results か ら, WGA - gp は ブ タ CD52 の mature タ ン パ ク で, 10 ア ミ ノ acid residues か ら な る GPI ア ン カ ー タ ン パ ク qualitative で あ り, 3 つ の sugar plus lock parts を hold つ こ と を Ming ら か に し た. さ ら に, こ の sugar lock structure を レ ク チ ン や quality analysis に よ っ て parsing し た results, N type sugar lock に ends of alpha Gal と コ ア Fuc residues が し, O sugar lock に は sulfuric acid base が exist す る こ と を in stopping し た. At the beginning of this study に よ っ て, め て ブ タ の sperm か ら CD52 を see し, そ の タ ン パ ク qualitative と sugar を lock structure be 験 に Ming ら か に し た. ま た WGA - gp は, そ の sugar lock に specific antibody of な mAb. 4 d1 を add す る こ と で, intracellular カ ル シ ウ ム concentration が - move す る こ と か ら, カ ル シ ウ ム system of the royal institution を adjust し て い る と exam え ら れ る. MAb. 4 d1 と カ ル シ ウ ム ポ ン プ や チ ャ ン ネ ル に す seaborne る resistance against tonic を に at the same time with い て, intracellular カ ル シ ウ ム concentration determination を し た results, L - type の カ ル シ ウ ム チ ャ ン ネ ル と PMCA ポ ン プ に す seaborne る の resistance against tonic で, antibody が inhibit さ れ た. こ の results か ら, WGA - gp は sugar lock を interface し て, こ れ ら の molecular を adjust し て い が る possibility in さ れ た. The カ カ シウム シウム within <s:1> cells regulates <s:1> function, CD52 <s:1> function と <s:1> て, and initial めて vocals された function である.