転写翻訳速度制御因子の探索と制御機構の解明

寻找转录翻译速率控制因子并阐明控制机制

• 批准号: 17J02835
• 负责人: 加藤 晃代
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Meijo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J02835/
• 关键词: 翻訳; タンパク質; 大腸菌

1. 大腸菌からの転写翻訳因子遺伝子クローニング:転写翻訳因子に関わる未知因子として、大腸菌由来rimM、era、rbfA、rsgA、cspEの5つの遺伝子をクローニングし、発現，精製した。また、翻訳制御を観察するために好適と考えられる遺伝子secMをクローニングし、実験材料として様々な発現パターンに使用するための7種類のプラスミドを構築した。2. N末端ペプチド付加による転写翻訳制御機構の解明:大腸菌の無細胞タンパク質合成系において、N末端への4アミノ酸不付加が、転写には影響を与えずに翻訳効率を促進していることを明らかにした。また、上記1にて精製した各種因子の効果を検討した。上記secM遺伝子を用いた実験では、N末端4アミノ酸配列が、secM翻訳において報告されているアレスト現象を解除している可能性を明らかにした。質量分析計を用いたタンパク質発現解析をおこない、翻訳機構解明における方法としての可能性を検討した。3. 小麦胚芽抽出液を用いた無細胞タンパク質合成系を用いた検討:大腸菌で効果の認められた翻訳促進効果をもたらすN末端ペプチド配列や、遺伝子外に存在する翻訳促進エレメント配列の影響を調べた。その結果、小麦胚芽系においては、N末端ペプチド配列よりも、開始コドン上流の配列が翻訳効率に影響することを明らかにした。4. 全長抗体の生産:大腸菌の無細胞タンパク質合成系で、N末端への4アミノ酸付加することにより、マウス全長抗体の合成が可能となることを明らかにした。5. 膜タンパク質の大量生産:大腸菌を用いて従来発現が困難とされる膜タンパク質の生産をおこなった。以上の研究実施状況は、研究計画に基づいており、おおむね順調に推移した。特に2, 3に関して得られた結果および知見は、申請研究題目を進展させる上で重要なものであった。

1. Coliform か ら の planning write turn 訳 factor heritage 伝 son ク ロ ー ニ ン グ : planning write turn 訳 factor に masato わ る unknown factor と し て, coliform origin rimM, era, rbfA, rsgA, cspE の 5 つ の posthumous son 伝 を ク ロ ー ニ ン グ し, 発, refined し た. ま た, double 訳 suppression を 観 examine す る た め に good comfortable と え ら れ る posthumous son 伝 secM を ク ロ ー ニ ン グ し, be 験 material と し て others 々 な 発 now パ タ ー ン に use す る た め の 7 kinds の プ ラ ス ミ ド を build し た. 2. N terminal ペ プ チ ド plus に よ る planning write turn 訳 royal institution の interpret: coliform の cell free タ ン パ ク qualitative GeChengXi に お い て, N terminal へ の 4 ア ミ ノ acid don't pay plus が, planning to write に は influence を and え ず に turn 訳 sharper rate を promote し て い る こ と を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0, note 1 above: にて refine <s:1> た various factors <s:1> effect results を検 seek <s:1> た. Written traces of secM 伝 son を with い た be 験 で は, N terminal 4 ア ミ ノ acid with が, secM turn 訳 に お い て report さ れ て い る ア レ ス ト phenomenon を remove し て い る possibility を Ming ら か に し た. Quality analysis meter を with い た タ ン パ ク qualitative analytical を 発 now お こ な い, turn 訳 agencies interpret に お け る method と し て の possibility を beg し 検 た. 3. The wheat germ extract を with い た cell free タ ン パ ク qualitative GeChengXi を with い た 検 beg: coliform で unseen fruit の recognize め ら れ た turn 訳 promote unseen fruit を も た ら す N terminal ペ プ チ ド with や, heritage 伝 son に exist outside す る turn 訳 promote エ レ メ ン ト match column の influence を adjustable べ た. そ の results, wheat germ に お い て は, N terminal ペ プ チ ド column with よ り も, start コ ド ン upper の match column が turn 訳 に sharper rate affect す る こ と を Ming ら か に し た. 4. の full-length antibody production: coliform の cell free タ ン パ ク qualitative GeChengXi で, N terminal へ の 4 ア ミ ノ acid plus す る こ と に よ り, マ ウ ス full-length antibodies の synthetic が may と な る こ と を Ming ら か に し た. 5. Membrane タ ン パ ク の mass production quality: coliform を with い て 従 to 発 が now difficult と さ れ る membrane タ ン パ ク の produce を お こ な っ た. The above is the implementation status of the <s:1> research, the basis of the に research plan づ てお てお, and the おおむね sequential に progression た た. に 2, and 3 に masato し て have ら れ た results お よ び knowledge は, application research topic を さ せ る で important な も の で あ っ た.

项目成果

シングルB細胞由来モノクローナル抗体の迅速取得と大腸菌による生産

快速获取源自单个 B 细胞的单克隆抗体并使用大肠杆菌进行生产

• 发表时间: 2018
• 作者: 加藤晃代;兒島孝明;中野秀雄
• 通讯作者: 中野秀雄

SKIK tag increasing the expression of hard-to-express proteins and its application to antibody screening from single B cells

SKIK标签增加难表达蛋白的表达及其在单B细胞抗体筛选中的应用

• 发表时间: 2018
• 作者: 加藤晃代;兒島孝明;中野秀雄;Teruyo Ojima-Kato
• 通讯作者: Teruyo Ojima-Kato

MALDI-TOF MSを用いたプロテオタイピングによるSalmonella entericaの血清型識別

使用 MALDI-TOF MS 进行蛋白分型鉴定肠道沙门氏菌的血清型

• 发表时间: 2018
• 作者: 加藤晃代;山本奈保美;永井里美;島圭介;秋山由美;太田順司;田村廣人
• 通讯作者: 田村廣人

N末端SKIKペプチドタグによるタンパク質発現増大に関する研究

N端SKIK肽标签增加蛋白表达的研究

• 发表时间: 2017
• 作者: 加藤晃代;兒島孝明;田村廣人;中野秀雄;加藤晃代
• 通讯作者: 加藤晃代

モノクローナル抗体取得技術の新展開 より良い抗体をより早く

单克隆抗体采集技术新进展：更快生产更好的抗体

• 发表时间: 2017
• 期刊: 化学と生物
• 作者: 加藤晃代;中野秀雄．
• 通讯作者: 中野秀雄．