Development of genetic diagnosis system based on gene mutation and degree of tumor differentiation for odontogenic tumor

基于基因突变和肿瘤分化程度的牙源性肿瘤基因诊断系统开发

• 批准号: 17K11917
• 负责人: 三上 俊成
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17K11917/
• 关键词: 遺伝子検査; 歯原性腫瘍; 次世代シーケンス; DNA解析; transcriptome解析; エナメル上皮腫; heterogeneity; 原始性歯原性腫瘍; 遺伝子診断; 遺伝子解析

本研究では研究計画に基づき、「腫瘍分化度と遺伝子変異に基づいた歯原性腫瘍の臨床的遺伝子診断システムの構築」を目的として研究を行った。研究用の症例サンプルは岩手医科大学、広島大学および海外研究協力者から集めた歯原性腫瘍症例（原始性歯原性腫瘍6例、象牙質形成性幻影細胞腫2例、腺腫様歯原性腫瘍8例、エナメル上皮腫2例）を用いた。遺伝子解析には次世代シーケンスおよびPCR法を用い、タンパクの発現解析では免疫組織化学を行った。その結果、原始性歯原性腫瘍では癌関連151遺伝子と歯の発生に関連する42遺伝子に変異は認められなかった。また正常歯胚と組織形態およびタンパク発現を比較した結果、分化度は帽状期から鐘状期後期に相当すると考えられた。象牙質形成性幻影細胞腫ではCTNNB1遺伝子に特異的な変異が認められた。腺腫様歯原性腫瘍では8例中6例にKRAS変異が認められたが、免疫染色ではMAPK伝達経路でKRASより上流のEGFRも活性化されていたことから、遺伝子変異が腫瘍化にどの程度関与しているか明らかでなかった。培養実験では、同一患者のエナメル上皮腫組織から初代培養にて樹立されたHAM1～3細胞を用いた。HAM細胞に対して次世代シーケンスによるtranscriptome解析を行った結果、HAM1、3はE-cadherin陽性（vimentin弱陽性）であるのに対しHAM2はE-caderhin陰性（vimentin強陽性）で、HAM2は間葉系細胞の特徴を有していた。しかしながらcell migration assayやwound healing assayにおける細胞の運動能はHAM1、3の方がHAM2よりも高かった。HAM2の間葉系の特徴が由来細胞から受け継いだものか、EMTによるものかは明らかでなかった。

This study was carried out in response to a research project entitled "Tumor differentiation and gene differentiation, and the construction of a gene diagnosis system for primary tumors." Examples of research patients include odontogenic ulcers (6 cases of primitive odontogenic ulcers, 2 cases of dentin-forming phantom cell tumors, 8 cases of adenomatous odontogenic ulcers, and 2 cases of ENAMERAL epithelioma) collected from Iwate Medical University, Hiroshima University, and overseas research collaborators. The gene analysis was performed by PCR and immunohistochemistry. The results showed that there were 151 genetic relationships between primary odontogenic tumors and the development of odontogenic tumors, and 42 genetic relationships between primary odontogenic tumors and the development of odontogenic tumors. Comparison of normal embryo morphology and differentiation between cap stage and late bell stage Dentin-forming phantom cell swelling is a unique disease of CTNNB1. In 6 of 8 cases of adenomatous cysts, KRAS expression was different, and MAPK expression was different. KRAS expression was different, and EGFR activity was different. Culture of HAM1~3 cells from primary culture of epithelial tissue from the same patient. HAM 1 and HAM 3 were E-cadherin positive (vimentin weak positive), HAM2 was E-cadherin negative (vimentin strong positive), and HAM2 was mesenchymal. The cell migration assay and wound healing assay were used to determine the cell migration activity in HAM1 and HAM2. The characteristics of HAM2's mesenchymal system are: cell origin, EMT, and EMT.

项目成果

Primordial odontogenic tumor: Subepithelial expression of Syndecan-1 and Ki-67 suggests origin during early odontogenesis.

原始牙源性肿瘤：Syndecan-1 和 Ki-67 的上皮下表达提示起源于早期牙源性肿瘤。

• DOI: 10.1111/odi.12733
• 发表时间: 2018
• 期刊: Oral Diseases
• 影响因子: 3.8
• 作者: Bologna-Molina R;Mikami T;Pereira-Prado V;Tapia-Repetto G;Pires FR;Carlos R;Mosqueda-Taylor A.
• 通讯作者: Mosqueda-Taylor A.

ポストゲノム時代の歯原性腫瘍研究 遺伝子解析から分子病理診断まで

后基因组时代的牙源性肿瘤研究：从基因分析到分子病理诊断

• 发表时间: 2017
• 作者: 三上俊成;岡田康男;行森 茜;落合隆永;中野 敬介
• 通讯作者: 中野 敬介

Primordial Odontogenic Tumor: A case report with histopathological analyses.

原始牙源性肿瘤：带有组织病理学分析的病例报告。

• DOI: 10.1111/pin.12601
• 发表时间: 2017
• 期刊: Pathology International
• 影响因子: 2.2
• 作者: Mikami T;Ohashi Y;Bologna-Molina R;Mosqueda-Taylor A;Fujiwara N;TsunodaN;Yamada H;Takeda Y.
• 通讯作者: Takeda Y.

口腔病理アトラス 第3版

口腔病理学图谱第三版

• 发表时间: 2018
• 作者: Kawakami T;Kaneko K;Takaya T;Aoki S;Muraoka R;Tomida M;Okafuji N;Shoumura M;Osuga N;Nakano K;Tsujigiwa H;Nagatuka H.;長塚 仁，中野敬介;長塚 仁
• 通讯作者: 長塚 仁

メトロポリタン自治大学(メキシコ)

大都会自治大学（墨西哥）