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小腸不全症に対する治療法の開発-無粘膜大腸作成の可能性についての基礎的研究-

小肠功能不全治疗方法的开发 - 关于创建无粘膜结肠的可能性的基础研究 -

基本信息

批准号：
19659459
负责人：
野田卓男
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

小腸不全症に対する治療法開発の基礎的研究として、有茎遊離無粘膜大腸内腔に小腸幹細胞を移植し小腸粘膜の再生を試みた。1) 6週SD雄性ラットを用いて、有茎遊離大腸1.5～3cmを腸間膜対側で開き、大腸粘膜を機械的に剥離した。8Fr栄養チューブをステントとし再度管腔構造とし、両端は盲端とした。胎仔小腸を取り出し、コラーゲン処理して作製した細胞塊を、前述の有茎遊離大腸内腔に注入した。移植後3週間で作製大腸を取り出して病理組織学的検討を行い、小腸粘膜が再生していることを確認した。2) この方法では小腸粘膜の再生効率が極めて低いことが問題で何らかの刺激因子が必要と報告されている。そこで、体外では内胚葉の分化の各段階に有効であることが報告されている塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)を添加した小腸幹細胞を含む溶液を作製し、生体内での小腸粘膜再生において有効に作用するか確認した。3) 胎仔小腸を酵素処理して得られた細胞塊に、A)移植する細胞塊にbFGFを50ng/ml添加するグループ、B)bFGFを添加しないグループ、に分け、各々14匹ずつ作製した。移植後3週間で犠死して無粘膜大腸を組織学的および免疫組織学的に評価した。4) 実験の手技的な原因や術後癒着性イレウスなどで15匹を失い、評価可能なラットはグループA)6匹、グループB)7匹であった。両グループ合わせて8匹に小腸粘膜の再生が認められたが、無粘膜大腸内腔を完全に覆うような再生はなかった。しかし、病理学、免疫組織化学的に小腸粘膜の正常な構造が形成されていた。小腸粘膜の部分的な再生はbFGFを使用したグループA)で100%(6/6)、bFGF非使用のグループB)で28.6%(2/7)に見られた。5) 上記の成果を論文発表するとともに、研究会(学会)でも発表した。

Basic research on the development of treatment for intestinal insufficiency, transplantation of small intestinal stem cells into the lumen of the large intestine without mucosa, and regeneration of small intestinal mucosa 1)6 weeks old SD male, 1.5~3cm free colon, intestinal membrane, mechanical dissection of large intestine 8th grade The fetal small intestine was extracted and processed to prepare the cell mass, and the stem was injected into the lumen of the large intestine 3 weeks after transplantation, the large intestine was harvested and histologically examined, and the small intestine mucosa was regenerated. 2)The method is to reduce the regeneration rate of small intestine mucosa and to report the stimulation factors. In vitro, there is an effect of bFGF on the differentiation of embryo leaves in vitro. In vivo, there is an effect of bFGF on the regeneration of intestinal mucosa. 3)Fetal small intestine enzyme treatment to obtain cell blocks, A) transplantation of cell blocks to add bFGF 50ng/ml, B)bFGF to add to cell blocks, 14-minute, each Histological and immunohistochemical evaluation of the mucosa free colon was performed at 3 weeks after transplantation. 4)The reasons for this technique include postoperative healing, 15 missing pieces, and evaluation of possible injuries. The mucosa of the small intestine is completely regenerated without mucosa. The normal structure of intestinal mucosa was formed by pathological and immunohistochemical examination. The regeneration of small intestinal mucosa was 100%(6/6) when bFGF was used and 28.6%(2/7) when bFGF was not used. 5)The results of the above paper are presented in the form of research institutes (societies).