ヒストン脱メチル化酵素阻害剤の抗がん薬理作用検証法の開発とコンセプト証明

组蛋白去甲基化酶抑制剂抗癌药理作用验证方法的开发及概念验证

• 批准号: 23701105
• 负责人: 三野 光識
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Nagahama Institute of Bio-Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23701105/
• 关键词: 分子標的治療; ヒストン脱メチル化酵素; エピジェネティクス; LSD1; GASC1; ヒストン修飾

抗がん分子標的としてのヒストン脱メチル化酵素(HDM)であるLSD1またはGASC1の働きを阻害し、がん細胞の増殖を抑制する化合物を複数種同定している。1.これまでに得たリード化合物について、抗がん作用の根拠となる薬理作用を細胞レベルで解析するための評価系として以下の方法を確立した。(1)増殖や浸潤に関係するHDMの標的遺伝子の発現定量法:LSD1の標的遺伝子としてTFPI-2を、GASC1の標的遺伝子としてMYCとNOTCH1を選択し、リアルタイムPCRによる発現定量法を確立した。LSD1の働きを阻害する既知化合物(トラニルシプロミン、NCL-1)を与えたHEK293細胞、及び、GASC1の働きを阻害する既知化合物(NOG)をジメチルエステル化したプロドラッグ体を与えたKYSE150細胞で、それぞれの標的遺伝子の予想される発現量の変化(TFPI-2遺伝子の発現量の増加、MYCとNOTCH1遺伝子の発現量の減少)を確認することができた。(2)クロマチン免疫沈降法:クロマチン中の標的遺伝子と結合しているヒストンH3蛋白質のメチル化状態を、ヒストンメチル化認識モノクローナル抗体を用いて定量する条件を確立した。LSD1の働きを阻害する既知化合物(1mMトラニルシプロミン、30μM NCL-1)を与えたHEK293細胞で、TFPI-2遺伝子のプロモーター領域に結合しているヒストンH3蛋白質の4番目のジメチル化リシン残基量の増加を検出することができた。2.確立した評価系の検証にあたり、siRNAを用いた遺伝子発現抑制実験を行った。LSD1遺伝子をノックダウンしたHEK293細胞では、TFPI-2遺伝子の発現量の増加と細胞の生存率の低下が見られた。一方、GASC1遺伝子をノックダウンしたKYSE150細胞では、MYCとNOTCH1遺伝子の発現量の減少と細胞の生存率の低下が見られた。

A number of compounds are identified that inhibit the growth of cells and inhibit the production of LSD1 and GASC1 by molecular targets such as HDM. 1. To establish the following methods for the analysis and evaluation of the biological effects of these compounds. (1)Quantitative detection of target genes in HDM related to proliferation and infiltration: target genes of LSD1 and TFPI-2, target genes of GASC1 and MYC and NOTCH1 were selected, and quantitative detection of target genes by PCR was established. LSD-1 is a well-known compound that can inhibit the growth of human beings.(NCL-1) and HEK293 cells, and GASC1 cells. Changes in the expected amount of NOG and KYSE150 cells.(Increase in TFPI-2 and decrease in MYC and NOTCH-1) (2)Immuno-precipitation method: To establish the conditions for the quantification of H3 protein in the presence of target proteins and binding sites. Known compounds (1mM NCL-1, 30μM NCL-1) that inhibit LSD1 activity bind to HEK293 cells and TFPI-2 protein domain, increasing the amount of NCL-1 residues in the four segments of H3 protein. 2. To establish a system of detection and detection, siRNA use in gene expression inhibition The increase in the production of LSD-1 gene and the decrease in cell survival rate were observed in HEK293 cells. A decrease in the production of MYC and NOTCH1 genes and a decrease in the survival rate of KYSE150 cells were observed.